GLP-1對(duì)2型糖尿病大鼠胰島β細(xì)胞PDX-1基因表達(dá)的作用.pdf

1、目的：觀察胰高血糖素樣肽-1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）類似物利拉魯肽對(duì)2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus，T2DM)大鼠糖脂代謝的作用，以及對(duì)胰腺十二指腸同源盒-1(pancreatic duodenal homeobox-1，PDX-1)基因表達(dá)水平的影響，探討GLP-1對(duì)胰島β細(xì)胞增殖與再生的作用和可能機(jī)制。
　　 方法：適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，將48只體重180g～22

2、0g雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，分別為正常對(duì)照組8只，T2DM未治療組10只，利拉魯肽組15只，羅格列酮組15只，正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余各實(shí)驗(yàn)組給予高脂飼料喂養(yǎng)，共8w。第8w末各實(shí)驗(yàn)組大鼠以鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)30mg/(kg*bw)腹腔注射造模，糖尿病大鼠成模后，利拉魯肽組給予利拉魯肽200μg/kg皮下注射，每日2次，羅格列酮組給予羅格列酮4mg/kg灌胃，每日1次，持續(xù)4周。正常對(duì)

3、照組及T2DM未治療組給予相同體積的生理鹽水皮下注射。于藥物治療前1天及治療4w結(jié)束時(shí)分別取大鼠血清，檢測(cè)空腹血糖(Fasting Blood glucose，F(xiàn)BG)、空腹胰島素(Fasting serum insulin，F(xiàn)INS)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(High-densitylipoprotein cholestero，HDL-C)

4、、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoproteincholesterol，LDL-C)。同時(shí)處死所有大鼠，取出胰腺組織，以HE染色，以免疫組織化學(xué)染色觀察胰腺胰島細(xì)胞的胰島素(insulin，INS)、胰島增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表達(dá)變化，以原位末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測(cè)胰

5、腺胰島細(xì)胞凋亡，以實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time fluorescent quantitative reversetranscription-polymerase chain reaction，Real-Time RT-PCR)法檢測(cè)胰腺胰島細(xì)胞PDX-1基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：⑴持續(xù)高脂喂養(yǎng)8周，各實(shí)驗(yàn)組體重較正常對(duì)照組均明顯增高(P＜0.001)。STZ腹腔注射后，各實(shí)驗(yàn)組體重均下降，至藥物治療前其體

6、重仍大于正常對(duì)照組（P＜0.05）。治療后，未治療組及羅格列酮組體重較治療前增加，其體重均大于正常對(duì)照組(P＜0.05)。利拉魯肽組體重較治療前未增加，其體重與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與未治療組及羅格列酮組比較，利拉魯肽組體重下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。⑵與正常對(duì)照組比較，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組治療前和治療后FBG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)(insulin resistance index，HOMA-IR)均明顯增高

7、(P＜0.001)，胰島素敏感指數(shù)(Insulin sensitivity index，ISI)均明顯降低(P＜0.001)。利拉魯肽組及羅格列酮組治療后FBG、FINS、HOMA-IR均較未治療組明顯降低(P＜0.001)，ISI明顯升高(P＜0.001)。利拉魯肽組較羅格列酮組FBG降低(P＜0.05)，F(xiàn)INS增高（P＜0.001），ISI、HOMA-IR較羅格列酮組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與治療前比較，治療后利拉魯肽組

8、及羅格列酮組FBG、FINS、HOMA-IR均下降(P＜0.001)，ISI較治療前增高(P＜0.001)。⑶與正常對(duì)照組比較，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組治療前TG、TC、LDL-C明顯增高(P＜0.001或P＜0.05)，HDL-C明顯降低(P＜0.001)。治療后，與未治療組比較，利拉魯肽組和羅格列酮組TG、TC明顯降低(P＜0.001);對(duì)LDL-C，利拉魯肽組降低(P＜0.05)，但羅格列酮組無(wú)明顯下降（P＞0.05），利拉魯肽組和羅格列酮組H

9、DL-C均無(wú)明顯改善(P＞0.05)。與羅格列酮組比較，利拉魯肽組TG、TC、LDL-C、HDL-C差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，利拉魯肽組和羅格列酮組TG、TC均較治療前下降(P＜0.05)，但利拉魯肽組和羅格列酮組HDL-C均較治療前降低(P＜0.05)，羅格列酮組LDL-C較治療前增高(P＜0.05)，利拉魯肽組LDL-C與治療前比較無(wú)下降(P＞0.05)。⑷HE染色結(jié)果：未治療組:胰島體積縮小，分布彌散，部分胰島排列、形狀不規(guī)則，結(jié)

10、構(gòu)不清，胰島細(xì)胞數(shù)量減少，部分可見(jiàn)細(xì)胞核固縮；治療組:胰島形狀偶可見(jiàn)不規(guī)則，界限稍模糊，胰島細(xì)胞數(shù)量較未治療組增加。利拉魯肽組和羅格列酮組差異不顯著。⑸免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：未治療組:低倍鏡下胰島細(xì)胞少見(jiàn)，形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，棕褐色顆粒含量少;高倍鏡下細(xì)胞界限不清晰，細(xì)胞核呈偏心分布，棕褐色顆粒含量少，著色淺；治療組:低倍鏡下胰島形態(tài)基本正常，邊緣尚完整，棕褐色顆粒含量較未治療組增加;高倍鏡下細(xì)胞界限基本清晰，部分胞核呈偏心分布，著

11、色程度較未治療組深。利拉魯肽組較羅格列酮組稍有改善，但差異無(wú)顯著性；胰腺胰島β細(xì)胞凋亡變化:藥物治療后，與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組胰島β細(xì)胞凋亡率明顯增高（P＜0.001），與未治療組比較，利拉魯肽組和羅格列酮組胰島β細(xì)胞凋亡率明顯降低（P＜0.001），與羅格列酮組比較，利拉魯肽組胰島β細(xì)胞凋亡率降低(P＜0.05)。⑹胰腺胰島β細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)狀況:藥物治療后，與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組PDX-1 mRNA的表達(dá)量明顯降低

12、(P＜0.001)，與未治療組比較，利拉魯肽組和羅格列酮組PDX-1 mRNA的表達(dá)量明顯增高（P＜0.001），與羅格列酮組比較，利拉魯肽組PDX-1 mRNA的表達(dá)量明顯增高(P＜0.001)。Pearson直線相關(guān)分析顯示，PDX-1 mRNA的表達(dá)量與FBG、FINS、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR、胰島β細(xì)胞凋亡率呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，與ISI、HDL-C成正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：利拉魯肽可改