草莓離體再生及HAL1基因的遺傳轉化研究.pdf

1、本試驗以“賽娃”、“紅花草莓”、“公四莓一號”、“阿迪”等幾個草莓品種為試材，研究了基本培養(yǎng)基、草莓基因型、激素配比、pH值、接種方式、繼代時間、暗培養(yǎng)時間對草莓不定芽再生的影響，優(yōu)化了草莓再生條件，建立了賽娃的葉片高效再生體系，獲得了抗草丁膦的抗性植株，建立了草莓品種“賽娃”的遺傳轉化體系。 主要取得以下研究結果：1基因型和再生培養(yǎng)基的初步篩選以田間采集的草莓葉片為試材，對基因型和再生培養(yǎng)基進行了初步篩選，同時獲得了上述4個品

2、種的無菌試管苗.再生實驗結果表明，賽娃草莓的葉片再生能力明顯高于其它3個品種，為此，試驗選定賽娃做進一步的再生和轉化的研究。 2不同因素對草莓試管苗葉片再生的影響 (1)基本培養(yǎng)基和激素配比對再生的影響基本培養(yǎng)基和激素配比直接影響草莓再生，MS培養(yǎng)基與MS(無機成分)+B5(有機成分)和1/2MS培養(yǎng)基相比，可得到較高的不定芽再生率。細胞分裂素KT與6-BA單獨使用效果不明顯，二者混合使用葉片的再生率與每個葉片的再生芽數(shù)

3、均明顯提高，而且再生不定芽長勢良好。外植體可在MS+KT1.0mg/L+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基上再生，再生率達到91.7﹪，再生芽可在MS+KT1.0mg/L+BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L的培養(yǎng)基上增殖，再生苗適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS。 (2)蔗糖、瓊脂濃度和pH值對草莓葉片再生的影響蔗糖、瓊脂濃度和pH值也對草莓再生有顯著影響，蔗糖在組織中既是碳素來源和能量物質，又是重要的滲透壓調(diào)節(jié)劑

4、。瓊脂是植物組織培養(yǎng)中良好的固定劑，對外植體起到一定的支撐作用。每種植物只有在適宜的pH值下才能得以正常生長。本研究認為在培養(yǎng)基中加入20g/L蔗糖，7g/L瓊脂，pH值調(diào)到5.8時對草莓葉片的再生具有促進作用。 (3)其他因素對草莓葉片再生的影響在暗處理培養(yǎng)時，與以往研究結果不同的是：暗培養(yǎng)對草莓品種賽娃的再生沒有影響。苗齡影響草莓的再生，以30天葉齡為最佳取材時期。研究葉片放置于培養(yǎng)基上的方向對葉片再生的影響時，發(fā)現(xiàn)正放有利

5、于草莓葉片的再生。 3HAL1基因的轉化在建立賽娃葉片不定芽再生體系的基礎上，利用農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化法進行賽娃的遺傳轉化研究。結果表明：預培養(yǎng)2d，菌液濃度為OD600=0.5，侵染時間為20分鐘，共培養(yǎng)2天的條件下轉化效率最高，MES的存在可以提高轉化效率。選擇培養(yǎng)中basta濃度過高不利于不定芽的分化，0.6mg/L的basta可有效地抑制非轉化芽的再生。不定芽對高濃度的Cef敏感，試驗中以500mg/L的Cef作為農(nóng)桿菌