青菜離體再生和農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究.pdf

1、該文研究了青菜的再生體系和農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化幾種重要因子的影響,并首次探討了輻射處理對青菜再生和遺傳轉(zhuǎn)化的影響.為建立青菜的高頻再生體系,對影響青菜再生的因素進(jìn)行了分析.為了能有效地殺除共培養(yǎng)后殘余的農(nóng)桿菌和篩選轉(zhuǎn)化體,測定了青菜對5種抗生紗的敏感性.經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明,離體培養(yǎng)的子葉對潮霉素的敏感性大于卡那霉素.因此,在青菜的遺傳轉(zhuǎn)化中應(yīng)使用潮霉素作為篩選轉(zhuǎn)化體,濃度以25mg/L為宜.在所用的羧芐青霉素、氨芐青霉素、頭孢霉素三種抑菌抗生素中,根

2、據(jù)它們對芽再生的影響,應(yīng)首選羧芐青霉素.為建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)青菜轉(zhuǎn)化的穩(wěn)定體系,以gus基因瞬時(shí)表達(dá)頻率為指標(biāo),對影響轉(zhuǎn)化頻率的幾個(gè)重要因子進(jìn)行了優(yōu)化.該文還研究了γ射線輻射處理對青菜離體再生和轉(zhuǎn)化的影響.在再生試驗(yàn)時(shí),分別要用了γ射線處理外植體的供體--無菌苗和培養(yǎng)中的外植體.發(fā)現(xiàn)用1～5Gy的劑量處理外植體能明顯促進(jìn)不定芽的再生.在轉(zhuǎn)化時(shí),分別對在感染前和感染后對外植體進(jìn)行了輻射處理.結(jié)果表明在感染后用低劑量處理有助于gus瞬時(shí)表達(dá)的提