苦蕎離體再生體系的建立和遺傳轉化研究.pdf

1、本文試圖通過基因工程技術來提高苦蕎的耐鹽性，期望獲得優(yōu)良抗逆新品系，這對我國苦蕎種植業(yè)的發(fā)展有重要的意義。 以苦蕎的子葉和下胚軸為外植體研究了苦蕎植株再生的胚狀體發(fā)生途徑和器官發(fā)生途徑，建立起苦蕎的高頻再生體系。試驗結果表明來自下胚軸的胚性愈傷組織在附加2.0 mg·L<'-1> BA、0.5 mg·L<'-1> KT、0.1 mg·L<'-1> NAA的1/2MS培養(yǎng)基上芽的誘導率最高達到76％，來源于子葉的胚性愈傷組織在附加

2、1.0 mg·L<'-1>BA、0.1 mg·L<'-1> KT、0.1 mg·L<'-1> NAA的1/2MS培養(yǎng)基上下芽的誘導率也達到71％。MS+1 mg·L<'-1>NAA是適宜的再生苗生根培養(yǎng)基。 在建立苦蕎胚狀體發(fā)生途徑再生體系的基礎上，采用攜帶擬南芥AtNHX1基因的根癌農桿菌LBA4404菌株轉化苦蕎子葉和下胚軸，最終獲得了具有卡那霉素抗性的愈傷組織，并分化形成了轉基因植株。經PCR、RT-PCR和Souther

3、n檢測證實AtNHX1基因已成功地整合到苦蕎基因組中。對轉基因愈傷組織及其再生植株進行NaCl脅迫試驗，發(fā)現在不同的鹽濃度下轉基因愈傷組織和再生植株的生長狀態(tài)均明顯優(yōu)于未轉化的對照組，轉化的愈傷組織在NaCl濃度為1.5％時愈傷組織仍能存活。轉化植株在1％NaCl脅迫時植株生長狀況明顯優(yōu)于未轉化植株，表明AtNHX1基因導入后確實可以提高苦蕎組織的耐鹽性。 高效液相層析實驗結果顯示在愈傷組織形成過程中蘆丁含量會明顯下降，子葉愈傷