黑麥草離體再生體系的建立和基因槍法介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩61頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、黑麥草是禾本科黑麥草屬植物,被廣泛用作草坪草和牧草,利用基因工程技術(shù)對其進行遺傳改良研究一直備受人們關(guān)注。本實驗在建立高效的多年生黑麥草離體再生體系的基礎(chǔ)上,通過基因槍法轉(zhuǎn)移bar基因,獲得了多年生黑麥草的轉(zhuǎn)基因植株,為黑麥草品種的改良提供了新的途徑。 一、黑麥草離體再生體系的建立經(jīng)過對比試驗,以成熟胚為外植體,成功地建立了黑麥草的再生體系,篩選出適合于黑麥草成熟胚的再生培養(yǎng)基配方。實驗結(jié)果顯示愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS基本培養(yǎng)基

2、+5mg/L 2,4-D為最佳,胚性愈傷組織誘導(dǎo)頻率為23.8%;分化培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+1mg/L6-BA,分化頻率可以達到33.3%。 二、多年生黑麥草遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立對愈傷組織進行除草劑Bialaphos敏感性試驗,確定了篩選愈傷組織的最佳選擇壓為2mg/L,在此基礎(chǔ)上建立了多年生黑麥草胚性愈傷組織的基因槍法遺傳轉(zhuǎn)化體系。實驗過程中,首先在含有甘露醇和山梨醇各0.25mol/L的MS培養(yǎng)基上對生長旺盛的胚性愈傷組織進

3、行5~12個小時的高滲處理,然后實施基因槍轟擊。轟擊時的真空度為28英寸汞柱,氦氣氣壓為1350psi,每槍的金粉用量為500μ/L。轟擊16小時后將愈傷組織轉(zhuǎn)入附加Bialaphos的培養(yǎng)基中,經(jīng)過三輪(各10天)選擇培養(yǎng),得到抗性愈傷組織。將抗性愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中,20天左右后陸續(xù)有再生苗長出。將再生苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基,長出壯根后移栽。PCR檢測結(jié)果證實bar基因已整合至黑麥草基因組中,同時進行了gus基因的表達分析。在得到的3

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論