水稻籽粒24nt-siRNA對miRNA及籽粒表型的影響.pdf

1、24nt-siRNA是植物體中最為豐富的小RNA，水稻籽粒24nt-siRNA的表達發(fā)生變化后對miRNA的表達是否有影響仍不明確。本實驗利用24nt-siRNA產(chǎn)生途徑中3個關(guān)鍵酶基因（DCL3a、POLⅣ、RDR2）的胚乳特異性水稻轉(zhuǎn)基因干擾株系，通過大規(guī)模小RNA測序檢測siRNA和miRNA的表達量變化，預(yù)測差異miRNA的靶基因功能，分析籽粒24nt-siRNA表達量減少后對miRNA表達的影響，為研究24nt-siRNA影響

2、miRNA表達的作用機理奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　1、利用Q-PCR定量檢測水稻花后9天的籽粒中目的基因的表達，結(jié)果表明，RNAi株系中三個目的基因DCL3a、POLⅣ、RDR2的表達量顯著減少。
　　2、利用高通量測序技術(shù)，對目的基因沉默顯著株系的籽粒小RNA進行測序。3個Os DCL3a、OsPOLⅣ、OsRDR2轉(zhuǎn)基因干擾株系中，24nt-siRNA表達量減少。與野生型日本晴相比，DCL3ai-6中表達量顯著增加的

3、miRNA占54.24％（32/59），POLⅣi-11中占54.84%（17/31），RDR2i-23-1中占12.20%（5/41）；進一步借助psRNATarget數(shù)據(jù)庫分析鑒定了190個差異miRNA的靶基因，利用AgriGO進行功能注釋，其靶基因在reproduction、developmental process和reproductive process等生物學(xué)過程中得到顯著富集，說明差異miRNA可能在調(diào)節(jié)水稻籽粒發(fā)育中具

4、有重要的作用。
　　3、對osa-miR156l-5p、osa-miR167e-3p和osa-miR1861d在OsDCL3a、OsPOLⅣ、OsRDR2轉(zhuǎn)基因干擾株系中表現(xiàn)趨勢相同的miRNA及其前體進行表達量檢測。結(jié)果表明，Pre-miRNA和miRNA的變化情況一致，說明24nt-siRNA表達減少以后對miRNA表達的影響發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，而不是發(fā)生在miRNA轉(zhuǎn)錄后加工水平上。
　　4、分析水稻植株性狀和籽粒性狀，