蔗糖對水稻籽粒灌漿及蔗糖合成酶基因表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、該文旨在以大面積推廣應(yīng)用的、具有代表性的秈型雜交稻組合汕優(yōu)63和常規(guī)高產(chǎn)粳稻武育粳3號探索蔗糖合成酶(SS:Sucrose Synthase)純化和蔗糖合成酶抗體制備的方法,研究水稻籽粒在充實過程中蔗糖量的變化對水稻籽粒灌漿及蔗糖合成酶基因表達(dá)的調(diào)控,研究內(nèi)容如下:1.分離高純度的蔗糖合成酶.采用勻漿粗提、高速離心、固體硫酸銨分段鹽析、葡聚糖凝膠色譜(Sephadex G-100)、DEAE-纖維素離子交換色譜、瓊脂糖凝膠色譜(Seph

2、arose CL-6B)等方法提純蔗糖合成酶.純化的蔗糖合成酶蛋白在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳上有兩條帶,一條染色深蔗糖合成酶帶,一條染色淺的雜蛋白帶,高效液相色譜(HPLC)上鑒定純度,含量為71.2％,用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蔗糖合成酶分子量為380kDa.2.制備蔗糖合成酶抗體.利用分離純化得到的蔗糖合成酶作為抗原,第一、二、三免通過皮內(nèi)多位點分次注射法免疫新西蘭大白兔,第四、第五免疫通過耳緣靜脈注射.獲得免疫血清經(jīng)瓊脂擴(kuò)散

3、實驗測定抗體效價達(dá)1:8以上,頸動脈采血,每只兔子采血160mL,分離血清后分裝,-20℃保存.3.在水稻開花期,通過疏花和剪葉處理改變輸入籽粒蔗糖量,在籽粒生長的5天、10天、15天、20天、25天取強(qiáng)勢粒和弱勢粒,進(jìn)行蔗糖、可溶性總糖、淀粉含量及蔗糖合成酶活性的測定,研究蔗糖對蔗糖合成酶活性的影響.結(jié)果表明,蔗糖對水稻籽粒灌漿及蔗糖合成酶活性具有調(diào)節(jié)作用.4.利用蔗糖合成酶抗體進(jìn)行Western blotting實驗.對取下的強(qiáng)弱勢