棉花黃萎病拮抗細(xì)菌DS45-2菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及抗菌蛋白分離.pdf

1、由大麗輪枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）引起的黃萎病是棉花的主要病害，嚴(yán)重影響棉花的生產(chǎn)，目前生物防治被認(rèn)為是一種最具有發(fā)展?jié)摿Φ挠行Х乐畏椒?。本研究的主要目的是對實驗室分離保存的棉花黃萎病病原菌大麗輪枝菌的拮抗細(xì)菌DS45-2菌株的產(chǎn)抗菌蛋白發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，并研究了蛋白提取物的部分性質(zhì)及抗菌蛋白的分離純化。
　　 首先對DS45-2菌株產(chǎn)抗菌蛋白發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，在不同的碳源、氮源和無機(jī)鹽中，

2、篩選出葡萄糖為碳源，大豆蛋白胨為氮源，KH2PO4為主要無機(jī)鹽。發(fā)酵培養(yǎng)基各組分配比利用SAS軟件的Box-Behnken中心組合設(shè)計法進(jìn)行優(yōu)化，實驗驗證最佳培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.7％，大豆蛋白胨2.2％，KH2PO40.2％，pH6.5。發(fā)酵工藝參數(shù)優(yōu)化采用正交設(shè)計優(yōu)化方法，選用L16（45）正交表，實驗驗證產(chǎn)抗菌蛋白的最佳培養(yǎng)條件為：在裝液量50mL/250 mL三角瓶中，接種2.0％種齡為10 h的種子，于30℃，220 r/mi

3、n搖床振蕩培養(yǎng)42 h，得到最大量的抗菌蛋白。發(fā)酵液經(jīng)氯仿、乙酸乙酯萃取后，萃取物無抗菌活性。
　　 用硫酸銨沉淀DS45-2菌株發(fā)酵液中的抗菌蛋白，透析、真空冷凍干燥后檢測抑菌活性，并對其理化性質(zhì)進(jìn)行了研究?？咕鞍滋崛∥飳ξ傅鞍酌负鸵鹊鞍酌妇幻舾?，蛋白酶K部分敏感：對熱穩(wěn)定；在中性條件下抑菌活性最高，堿性條件下穩(wěn)定，酸性條件下抑菌活性降低?？咕鞍滋崛∥飳Χ喾N病原真菌有拮抗作用。
　　 DS45-2菌株發(fā)酵液經(jīng)硫酸