棉花黃萎病拮抗細(xì)菌12-34菌株的分離鑒定及抗菌蛋白純化.pdf

1、棉花是我國(guó)重要經(jīng)濟(jì)作物，而棉花黃萎病是當(dāng)前影響我國(guó)棉花產(chǎn)量與品質(zhì)的主要病害之一，是由大麗輪枝菌（Vertillium dahliae Kleb）引起的一種危害性極大的維管束系統(tǒng)病害。利用生物防治手段已經(jīng)成為防治棉花黃萎病的新途徑。
　　 從棉花根際土壤中分離到了一株對(duì)大麗輪枝菌有拮抗活性的菌株12-34，該菌株是一種具有較廣抗菌譜的細(xì)菌。
　　 對(duì)12-34菌株進(jìn)行了形態(tài)觀察和生理生化的實(shí)驗(yàn)研究，初步認(rèn)定該菌株屬于芽孢桿

2、菌屬，提取其16S rDNA序列，將16S rDNA序列在NCBI 網(wǎng)站中進(jìn)行同源性比較，利用Neighbor-Joining法繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，結(jié)合生理生化反應(yīng)以及16S rDNA基因序列分析確定12-34菌株為Bacillus velezensis。
　　 對(duì)12-34菌株進(jìn)行了發(fā)酵條件優(yōu)化，采用不同的培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、搖床轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)基和不同的pH值對(duì)12-34菌株進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)其發(fā)酵液的抗菌活性進(jìn)行檢測(cè)，得到了抗菌蛋白的最佳

3、培養(yǎng)基組成為：玉米粉5％，牛肉浸膏3％，CaCl2 0.10％，KCl 0.05％。
　　 抗菌蛋白產(chǎn)生的最佳條件為：發(fā)酵時(shí)間48 h，裝瓶量50 mL/250 mL，接種量10％，培養(yǎng)基初始pH9.0，于37℃,200 r·min-1 搖床振蕩培養(yǎng)48 h。
　　 經(jīng)過(guò)80％硫酸銨鹽析，對(duì)其蛋白采用DEAE Sepharose Fsat Flow 弱陰離子和CMSepharose Fsat Flow 弱陽(yáng)離子交換層析后