棉花黃萎病拮抗菌的篩選及抗菌蛋白的分離提純.pdf

1、棉花黃萎病是由大麗輪枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）引起的一種危害性極大的維管束病害，是當(dāng)前影響我國棉花產(chǎn)量和品質(zhì)的主要病害之一。
　　 近年來，我國棉花黃萎病不斷蔓延，危害逐年加重，被稱為“棉花的癌癥”。黃萎病在我國廣大棉區(qū)的猖獗發(fā)生，使其已經(jīng)成為我國棉花生產(chǎn)發(fā)展的主要障礙。因?yàn)槊藁S萎病是一種土傳病害，所以利用物理化學(xué)手段進(jìn)行黃萎病的防治效果甚微。目前許多學(xué)者開始主張通過生物防治的途徑來防治棉花黃

2、萎病。
　　 本試驗(yàn)從土壤中分離得到了芽孢菌29株，實(shí)驗(yàn)室已有113株芽孢菌，共有實(shí)驗(yàn)菌株142株。分別將這142株芽孢菌對棉3、V190進(jìn)行拮抗菌篩選，共篩選出對棉3具有拮抗作用的菌株60株，對V190具有拮抗作用的菌株39株。其中編號為DS45.2的芽孢桿菌對V190表現(xiàn)出很強(qiáng)的拮抗活性。
　　 通過對拮抗菌DS45-2進(jìn)行生長曲線測定，發(fā)現(xiàn)6～12h的種子培養(yǎng)基正處于對數(shù)生長期，最適于作種子液。采用不同的培養(yǎng)溫度、

3、不同的培養(yǎng)時間、不同的培養(yǎng)基和不同的pH值對拮抗菌DS45-2進(jìn)行培養(yǎng)，對其發(fā)酵液的抗菌活性進(jìn)行檢測，得到了抗菌蛋白產(chǎn)生的最佳條件為：在pH8.0的LBG培養(yǎng)基中30℃搖床恒溫培養(yǎng)48h后其抑菌效果最好。
　　 在碳源氮源的優(yōu)化試驗(yàn)中選擇不同種類的碳源，其中包括單糖類（葡萄糖、蔗糖、甘露醇）、雙糖類（乳糖、麥芽糖）、多糖類（淀粉、糊精）等分別對拮抗菌DS45-2的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行單因子試驗(yàn)。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，拮抗菌DS45-2對

4、單糖（葡萄糖、麥芽糖）的利用效率要明顯的高于多糖（淀粉）。確定出最優(yōu)碳源為葡萄糖，最佳濃度為4％。同法，確定出最優(yōu)有機(jī)氮源組合為0.5％的酵母膏與1％蛋白胨。
　　 對其發(fā)酵液進(jìn)行硫酸銨鹽析，發(fā)現(xiàn)DS45-2的粗蛋白對棉花黃萎病具有拮抗作用；對其進(jìn)行有機(jī)溶劑（氯仿）處理，發(fā)現(xiàn)其抗菌活性消失，初步認(rèn)定其拮抗物質(zhì)為蛋白質(zhì)。通過粗蛋白的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對熱不敏感，pH6.0～8.0時較穩(wěn)定。
　　 通過硫酸銨的