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文檔簡介
1、棉花黃萎病是由大麗輪枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)引起的一種危害性極大的維管束病害,是當前影響我國棉花產(chǎn)量和品質(zhì)的主要病害之一。
近年來,我國棉花黃萎病不斷蔓延,危害逐年加重,被稱為“棉花的癌癥”。黃萎病在我國廣大棉區(qū)的猖獗發(fā)生,使其已經(jīng)成為我國棉花生產(chǎn)發(fā)展的主要障礙。因為棉花黃萎病是一種土傳病害,所以利用物理化學手段進行黃萎病的防治效果甚微。目前許多學者開始主張通過生物防治的途徑來防治棉花黃
2、萎病。
本試驗從土壤中分離得到了芽孢菌29株,實驗室已有113株芽孢菌,共有實驗菌株142株。分別將這142株芽孢菌對棉3、V190進行拮抗菌篩選,共篩選出對棉3具有拮抗作用的菌株60株,對V190具有拮抗作用的菌株39株。其中編號為DS45.2的芽孢桿菌對V190表現(xiàn)出很強的拮抗活性。
通過對拮抗菌DS45-2進行生長曲線測定,發(fā)現(xiàn)6~12h的種子培養(yǎng)基正處于對數(shù)生長期,最適于作種子液。采用不同的培養(yǎng)溫度、
3、不同的培養(yǎng)時間、不同的培養(yǎng)基和不同的pH值對拮抗菌DS45-2進行培養(yǎng),對其發(fā)酵液的抗菌活性進行檢測,得到了抗菌蛋白產(chǎn)生的最佳條件為:在pH8.0的LBG培養(yǎng)基中30℃搖床恒溫培養(yǎng)48h后其抑菌效果最好。
在碳源氮源的優(yōu)化試驗中選擇不同種類的碳源,其中包括單糖類(葡萄糖、蔗糖、甘露醇)、雙糖類(乳糖、麥芽糖)、多糖類(淀粉、糊精)等分別對拮抗菌DS45-2的發(fā)酵培養(yǎng)基進行單因子試驗。從試驗結果可以看出,拮抗菌DS45-2對
4、單糖(葡萄糖、麥芽糖)的利用效率要明顯的高于多糖(淀粉)。確定出最優(yōu)碳源為葡萄糖,最佳濃度為4%。同法,確定出最優(yōu)有機氮源組合為0.5%的酵母膏與1%蛋白胨。
對其發(fā)酵液進行硫酸銨鹽析,發(fā)現(xiàn)DS45-2的粗蛋白對棉花黃萎病具有拮抗作用;對其進行有機溶劑(氯仿)處理,發(fā)現(xiàn)其抗菌活性消失,初步認定其拮抗物質(zhì)為蛋白質(zhì)。通過粗蛋白的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性試驗,發(fā)現(xiàn)其對熱不敏感,pH6.0~8.0時較穩(wěn)定。
通過硫酸銨的
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