芽孢桿菌組合BCL-8發(fā)酵條件優(yōu)化及抗菌蛋白的初步分離.pdf

1、以從新疆特殊環(huán)境篩選的具有廣譜抗性、協(xié)同增效作用的芽孢桿菌組合BCL-8(由Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44組成)為研究對(duì)象，研究了BCL-8的混菌搖瓶發(fā)酵條件，檢測(cè)了BCL-8的田問(wèn)防病促生性能，確定了其抗菌物質(zhì)的理化特性，并對(duì)單一菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)進(jìn)行初步的分離，結(jié)果如下： 1．通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定BCL-8最佳發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵工藝。最佳發(fā)酵培

2、養(yǎng)基為：玉米粉10g/L、豆粕10g/L、蜂蜜5g/L、碳酸鈉2g/L、磷酸氫二鉀2g/L、硫酸鎂02 g/L、碳酸鈣1g/L、硫酸錳0.1g/L、氯化鐵0.1g/L、氯化鈉0.5g/L、天冬氨酸0.003g/L。最佳搖瓶發(fā)酵工藝為：Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44的接種比例為2：1：2，培養(yǎng)基初始pH值為7.0，發(fā)酵溫度30℃，接種量為5％，250ml三角瓶裝發(fā)

3、酵培養(yǎng)基50ml，搖瓶轉(zhuǎn)速為200r/min。在該條件下發(fā)酵72h后BCL-8對(duì)立枯絲核菌抑菌效價(jià)達(dá)833U<,I>；比優(yōu)化前抑菌效價(jià)提高了62％。 2．利用BCL-8的發(fā)酵生物制劑對(duì)加工番茄立枯絲核病菌進(jìn)行了溫室盆栽、小區(qū)和大田防病促生試驗(yàn)。溫室盆栽和小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果一致反映出：BCL-8發(fā)酵液浸種后可促進(jìn)加工番茄的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，提高加工番茄對(duì)立枯病的防效，分別達(dá)58.62％和55.53％，明顯高于三株單一菌浸種后的效果。大田試驗(yàn)采用

4、先浸種、出苗后隨水滴灌的施用方式，加工番茄的出苗率提高了22％，苗的鮮重、干重和株高與對(duì)照相比分別提高了63.8％、61.8％和11.6％，開(kāi)花數(shù)和結(jié)果數(shù)也分別提高了51％和84％，對(duì)立枯病的防效達(dá)73％。 3．對(duì)BCL-8主要抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)研究表明，主要抗菌物質(zhì)與水合茚三酮反應(yīng)可顯紫色，雙縮脲反應(yīng)表現(xiàn)陽(yáng)性，證明BCL-8產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)為蛋白類。該抗菌蛋白熱穩(wěn)定性好，在120℃處理30min后抑菌活性仍保留72％；具有較好的

5、耐酸堿性，活性pH范圍在4.0-10.0之間；能耐受乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、氯仿等多種有機(jī)溶劑，紫外和可見(jiàn)光處理不影響其抑菌活性；蛋白酶K處理對(duì)抗菌蛋白的活性幾乎沒(méi)有影響；抗菌蛋白能有效抑制Fusarium oxysporum　f. sp．lycopersici、Rhizoctonia solani Kuhn、Phytophthora capsici、Sclerotinia sclerotiorum、Acidovora

6、x avenae subsp．citrulli、Alternaria solani Sorauer等多種病原菌。 4．三株菌Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44的無(wú)菌發(fā)酵液分別通過(guò)30％-60％、40％-100％和30％-50％的硫酸銨鹽析沉淀獲得的各自的抑菌粗蛋白，經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析，Bacillus sp．SL-