洋蔥假單胞菌G63脂肪酶產(chǎn)酶條件優(yōu)化及同源高效表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、從武漢、襄樊和長沙等地采集含油污土樣90份，經(jīng)平板粗篩、搖瓶復篩，得到酶活力在5.0U/mL以上菌株4株，其中洋蔥假單胞菌（Pseudomonas cepacia）G63酶活最高，達到15.5U/mL。 應用單因子試驗（Monofactorial Experiment）和正交實驗（Orthogonal test）對Pseudomonas cepacia G63產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵條件進行了快速優(yōu)化。首先應用單因子試驗確定Pseudomo

2、nas cepacia G63產(chǎn)脂肪酶最適碳源和最適氮源分別為：葡萄糖和酵母提取物。在此基礎上通過考察3個因數(shù)（A：葡萄糖，B：酵母提取物，C：橄欖油）, 每個因素均取3個水平, 選用正交表L9 (34) 進行試驗。得到較為合適的培養(yǎng)基組成。最后通過單因子試驗確定最適發(fā)酵溫度和最適起始pH。得到優(yōu)化培養(yǎng)條件為：酵母提取物2％，葡萄糖 0.5％，K2HPO4 0.3％, MgSO4 0.05％，起始pH7.5,在28℃培養(yǎng)60h后，酶活達

3、到45.23U/mL。與初始相比，酶活提高了2.66倍。 在此基礎上研究了Pseudomonas cepacia G63脂肪酶的酶學性質(zhì)。酶的最適pH和溫度分別為9.0和70℃，在pH5.0～9.5和70℃以下穩(wěn)定。同時酶對檢測的各短鏈醇有著非常好的穩(wěn)定性。 隨后本研究運用PCR的方法從高產(chǎn)脂肪酶的洋蔥假單胞菌（Pseudomonas cepacia）G63克隆了脂肪酶基因及其伴侶基因。該脂肪酶基因開放式閱讀框（ORF）

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