維生素K4對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、在歐美男性中，前列腺癌是僅次于肺癌的第二大致死病癥。前列腺癌主要發(fā)生于年齡較大的男性，有三分之二的患者年齡在65歲以上，而40歲以下的男性則很少發(fā)病。據(jù)一份檢驗(yàn)報(bào)告指出，2012年約有24000例新增前列腺癌病例，約28000人死于這種惡性腫瘤。
　　盡管近來(lái)在早期前列腺癌的診斷和多模式治療方法上取得了一些進(jìn)展，但對(duì)于那些雄激素非依賴性及激素難治性的復(fù)發(fā)病例，目前還沒(méi)有很有效的治療方法。因前列腺癌復(fù)發(fā)造成的死亡率仍然非常高，因此，

2、尋找能夠提高前列腺癌患者總體存活率的治療方法是十分緊急且必要的。
　　維生素K4(VK4)是一種水溶性的甲萘醌化合物，為VK2的人工合成衍生物，最初被用作臨床止血藥物。近些年已經(jīng)有研究表明VK與血管健康、骨代謝有著密切關(guān)系，VK作為γ-亞麻酸蛋白家族如凝血素、凝血因子Ⅶ、凝血因子Ⅸ和凝血因子Ⅹ合成中的輔因子，在凝血系統(tǒng)中扮演了很重要的角色。由于骨骼中含有3種VK依賴性蛋白（骨鈣素，羧基谷氨酸蛋白，蛋白S），并且它們可能參與骨代謝，

3、因此這些蛋白的功能受損可能對(duì)骨骼有不良影響。有報(bào)道指出VK還有免疫作用，并且VK對(duì)肝癌、白血病、結(jié)腸癌、肺癌、口腔癌、乳腺癌以及膀胱癌都有體外抗癌作用。本研究的目的在于探討VK4對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　本實(shí)驗(yàn)采用MTT法測(cè)定VK4對(duì)PC-3細(xì)胞增殖的抑制作用，使用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平、細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位(MMP)變化，Hoechst33258

4、染色觀察細(xì)胞內(nèi)核固縮與染色質(zhì)片段化，臺(tái)盼藍(lán)染色觀察VK4對(duì)正常小鼠脾細(xì)胞毒性作用，利用Western blot測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。MTT結(jié)果顯示，VK4對(duì)PC-3細(xì)胞增殖有抑制作用，并且這種作用呈劑量依賴，IC50值約為20.94μM。Hoechst33258染色結(jié)果顯示VK4引起了PC-3細(xì)胞內(nèi)DNA的斷裂產(chǎn)生凋亡小體。Annexin(V)-FITC/PI雙染確定了VK4誘導(dǎo)了PC-3細(xì)胞凋亡。PI染色確定了VK4對(duì)PC-3細(xì)胞周