太空誘變宮頸癌細胞的生物學研究.pdf

1、目的：研究太空誘變宮頸癌細胞的生物學特性，從太空誘變的宮頸癌細胞和地面對照細胞的差異表達基因探討太空誘變宮頸癌細胞生物學行為改變的原因。 方法：將搭載于“神舟四號”飛船飛行7天返地后的宮頸癌Caski細胞進行單克隆化，觀察細胞形態(tài)、MTT法測定細胞生長曲線初步篩選出變異株并測定其倍增時間、流式細胞儀檢測細胞周期、軟瓊脂細胞集落培養(yǎng)和裸鼠成瘤實驗檢測空間誘變細胞的惡性表型。分別抽提經太空誘變的宮頸癌細胞和地面對照細胞的總RNA，逆

2、轉錄cDNA并標記探針，將實驗組和對照組cDNA探針混合與一張含2，747個人類腫瘤相關基因的Oligo雙通道芯片雜交后分別用不同的波長掃描熒光強度，從而篩選出差異表達基因。從差異表達基因中分別挑選若干基因采用半定量RT-PCR并進行擴增，凝膠電泳后，對電泳圖進行灰度掃描驗證基因芯片結果。 結果：單克隆化后獲得1440株細胞克隆，發(fā)現(xiàn)空間誘變株出現(xiàn)多種細胞形態(tài)；MTT法篩選出4株變異株，其中有兩株編號為44F10和17E3的細胞

3、克隆生長速度快于對照組，其細胞周期分布改變，Gl期細胞減少，S期細胞增多；而另兩株編號為48A9和31F2的細胞克隆生長速度慢于對照組，其細胞周期分布規(guī)律與以上兩株相反；地面正常對照細胞、地面模擬對照細胞、44F10、17E3、48A9、31F2細胞的平均倍增時間依次為56.54h、58.44h、52.96h、5l.46h、101.76h、88.47h；軟瓊脂細胞集落形成率依次為9.7％、9.3％、14.7％、12.1％、0和0.1％，

4、誘變細胞與對照細胞之間的差異有顯著性(P<0.05)；將六組細胞分別注射入裸鼠體內，47天后處死動物，剝離出腫瘤組織并稱重，各組瘤塊平均重量依次為0.06596g、0.06558g、0.1749g、0.2487g、O.01074g、0.0184g，變異組與兩對照組的細胞成瘤能力比較，差異有顯著性(P<0.05)。 挑選44F10組，48A9組與地面對照組進行基因表達差異的分析。44F10組與地面對照比較有16個基因呈現(xiàn)差異表達，