睪丸支持細胞對大鼠原位肝移植術(shù)后急性排斥的抑制作用.pdf

1、目的(1)簡化、改進睪丸支持細胞(Sertolicell)的分離方法，減少分離細胞的制作成本、提高細胞的純度。(2)改良制作大鼠原位肝移植模型的方法，減少術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，提高生存率；建立穩(wěn)定的肝移植急性排斥模型。(3)通過不同途徑行Sertoli細胞—肝臟聯(lián)合移植，探討Sertoli細胞是否可為移植肝提供免疫保護。 方法(1)Sertoli細胞分離中省去以剪刀剪碎、DNAS消化、39℃下培養(yǎng)等程序，以200目網(wǎng)過濾，2步消化后

2、直接進入37℃培養(yǎng)。(2)采用“二袖套管法”，通過建立Wistar→Wistar或SD→SD大鼠肝移植模型熟練建立大鼠肝移植模型的技能，對術(shù)前用藥、麻醉、術(shù)中操作等細節(jié)加以改進。對照研究Wistar→SD、SD→Wistar、Wistar→Wistar配對組合的肝移植術(shù)后排斥反應，選取排斥反應強烈、穩(wěn)定的組合建立排斥反應模型。(3)以肝移植急性排斥模型Wistar→SD不干預組(A組n=14)為對照組，通過三種途徑進行Sertoli細胞

3、—肝臟聯(lián)合移植，分別為：受體術(shù)后腹腔注射組(B組n=14)、陰莖背靜脈注射組(C組n=14)及供體移植前門靜脈注射組(D組n=14)。分別觀察術(shù)后各組癥狀、體征、肝功能變化、移植肝病理特征等的變化。(4)供體門靜脈注射Sertoli細胞，為使細胞在肝內(nèi)有效嵌存，采用注射后門靜脈、肝上下腔靜脈阻斷15min，分別檢測阻斷前及阻斷后24h、7d肝功能變化(n=14)。(5)采用免疫組化、凋亡等技術(shù)檢測Sertoli細胞功能及作用，探討其對肝

4、移植急性排斥的影響。(6)統(tǒng)計學分析采用均數(shù)、方差分析、T檢驗等方法。 結(jié)果(1)簡化的細胞分離方法可保證細胞活率、純度、產(chǎn)量及功能，縮短細胞分離的時間，降低細胞分離的制作成本。(2)后期制作的肝移植模型Wistar→Wistar或SD→SD長期存活率達90％以上，幾乎無排斥反應。肝移植急排模型以Wistar→SD組排斥最強烈。(3)肝移植急排模型Wistar→SD不干預組14只，13只在14d內(nèi)死亡，1只存活超過14d。Ser

5、toli細胞腹腔注射組、陰莖背靜脈注射組和供體移植前門靜脈注射組分別有5、8、7只存活超過14d。各干預組存活率分別為：35.7％、57.1％、50.0％，與對照組(7.1％)比較：后兩組有顯著性差異(P＜0.05)，腹腔注射組差別不顯著(P＞0.05)；各干預組之間存活率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。供肝病理檢查顯示各干預組排斥反應較對照組輕。(4)門靜脈注射Sertoli細胞后，門靜脈、肝上下腔靜脈阻斷15min，阻斷前及阻斷后

6、24h、7d肝功能無明顯改變(P＞0.05)。(5)免疫組化及凋亡檢測發(fā)現(xiàn)肝移植后14d，Sertoli細胞仍存活并表達FasL，Sertoli細胞周圍有淋巴細胞集聚及凋亡的淋巴細胞。 結(jié)論(1)修改、簡化的Sertoli細胞分離、培養(yǎng)方法有效、周期短、創(chuàng)傷小、制作成本低、獲得的細胞功能良好。(2)Wistar→SD肝移植模型具有強烈、穩(wěn)定的急性排斥反應特征，可用于相關(guān)研究。(3)門靜脈注射Sertoli細胞后，門靜脈、肝上下腔