供體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制肝移植大鼠免疫排斥研究.pdf

1、目的：建立大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)模型，探討供體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）抑制肝移植大鼠免疫排斥的作用。方法：利用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型，分離培養(yǎng)供體MSCs，并觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組)、FK506組(B組)和MSCs組(C組)。行大鼠原位肝移植同時(shí)，A組同期輸注生理鹽水，B組術(shù)后隔天一次給予FK506（0.25mg/kg)灌胃2周，C組同期輸注與A組同劑量的供體MSCs給受體。觀(guān)察手術(shù)操作時(shí)間

2、及手術(shù)成功率及術(shù)后第10天肝功能的變化、病理改變、免疫組化TGF-β1與IL-10的表達(dá)、Y染色體定位及受體生存期。結(jié)果：大鼠原位肝移植模型制作，供體手術(shù)時(shí)間為(23±3)min ,受體手術(shù)時(shí)間為(45±5)min ,無(wú)肝期為(17±2)min，手術(shù)成功率為95.2%。MSCs細(xì)胞培養(yǎng)顯示，原代培養(yǎng)細(xì)胞呈現(xiàn)雜質(zhì)相對(duì)較多，融合性差，第3代培養(yǎng)細(xì)胞雜質(zhì)少，增值速度快，融合性強(qiáng)。術(shù)后第10天肝功能，C組受體大鼠的ALT和AST分別為103.1

3、6±31.03U/L及149.67±37.80U/L，較A組756.33±103.91U/L及635.00 ±134.43U/L顯著降低﹝P＜0.01﹞，且C組低于B組；病理變化，A組為重度排斥，B、C兩組排斥反應(yīng)較A組顯著減輕，且C組較B組病理反應(yīng)級(jí)別更低；免疫組化檢測(cè)TGF-β1及IL-10，B、C兩組顯示強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)且C組比B組更明顯，而A組則為弱陽(yáng)性表達(dá)；SRY原位分子雜交檢測(cè)顯示C組出現(xiàn)含Y染色體的雄性陽(yáng)性細(xì)胞（即MSCs），以