炭疽桿菌保護(hù)性抗原重組腺病毒的構(gòu)建及其氣溶膠免疫探索性研究.pdf

1、目的：探討利用腺病毒載體作為炭疽桿菌基因工程疫苗載體的可行性；探索重組腺病毒對霧化的耐受能力；探討腺病毒活載體疫苗霧化吸入免疫途徑的可行性。 方法： 1．PCR擴(kuò)增PA基因后克隆至質(zhì)粒pAdTrack-CMV，經(jīng)與pAdeasy一1同源重組，構(gòu)建重組腺病毒vAd-PA，轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，經(jīng)Western．blot檢測表明PA在293細(xì)胞中得到表達(dá)。 2．重組腺病毒肌肉注射和滴鼻免疫途徑免疫BALB／c小鼠，通過EL

2、ISA和MTT等實(shí)驗(yàn)對免疫鼠的特異性抗體、黏膜免疫反應(yīng)及細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行分析。 3．優(yōu)化重組腺病毒霧化條件，選擇最優(yōu)條件霧化免疫小鼠，通過ELISA和MTT等實(shí)驗(yàn)對免疫鼠的特異性抗體、黏膜免疫反應(yīng)及細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1．通過酶切鑒定的方法驗(yàn)證，成功構(gòu)建了重組腺病毒vAd-PA，并用Western-blot的方法驗(yàn)證了PA蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。 2．重組腺病毒通過肌肉注射和滴鼻的途徑免疫小鼠，均

3、能誘導(dǎo)特異的體液、黏膜和細(xì)胞免疫應(yīng)答。表現(xiàn)為血清中IgG升高，肺灌洗液中的IgA升高，以及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子濃度有所升高，MMT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示T細(xì)胞增殖程度高于對照組。 3．重組腺病毒霧化途徑免疫小鼠，可誘導(dǎo)特異的體液、黏膜和細(xì)胞免疫應(yīng)答。表現(xiàn)為血清中IgG升高，肺灌洗液中的IgA升高，MMT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示T細(xì)胞增殖程度高于對照組。 結(jié)論：炭疽桿菌重組腺病毒基因工程疫苗有望發(fā)展成為一種新型的基因工程疫苗：霧化吸入免疫