基于泛素-弓形蟲多價抗原的重組疫苗對小鼠的免疫保護性研究.pdf

1、剛地弓形蟲是一種重要的機會致病性原蟲，呈世界性廣泛分布，可感染所有溫血哺乳動物及鳥類。正常人感染弓形蟲通常表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染，但孕早期婦女在感染弓形蟲后，可能會導致流產(chǎn)、早產(chǎn)甚至死產(chǎn)，幸存者也常遺留嚴重的新生兒神經(jīng)和視網(wǎng)膜病變。而當人類或其他宿主免疫力降低或缺乏時，弓形蟲即可在體內(nèi)大量繁殖并引起如弓形蟲腦病之類的嚴重的臨床癥狀甚至死亡。由于現(xiàn)階段并沒有有效的藥物來治療弓形蟲病，因此對于抗弓形蟲疫苗的研究是非常有前景的。
　　目

2、前，關于抗弓形蟲疫苗目前有大量的研究，包括滅活疫苗，減毒活疫苗以及基因工程疫苗。但是，減毒活疫苗可能發(fā)生毒力返強，存在再感染的可能。而基于不同弓形蟲抗原的基因工程疫苗因其抗弓形蟲感染的安全有效而得到人們越來越多的關注。然而，許多研究顯示基于不同弓形蟲抗原的DNA疫苗雖被證實可引起保護性的Th1型免疫反應抵抗弓形蟲感染，但由于弓形蟲有三個感染時期:速殖子，緩殖子（存在于包囊）和子孢子（存在于卵囊），從而使基于弓形蟲單一感染階段的抗原的疫苗

3、不能產(chǎn)生完整的抗弓形蟲的保護作用。因此，構建含有弓形蟲多生活史時期抗原組成的多價疫苗是十分必要的。
　　我們從弓形蟲速殖子，緩殖子以及子孢子時期的抗原中篩選出7個富含CD8+T細胞表位的抗原蛋白片段SAG3101-144，ROP18347-396，MIC6288-347，GRA7182-224，MAG158-125，BAG1156-211和SPA142-200，及1個CD4+T細胞表位，AS15，并將它們連接起來構建了弓形蟲多階段

4、抗原片段;并與泛素佐劑連接，構建表達泛素-弓形蟲多階段抗原的重組DNA和腺病毒疫苗;我們將這兩種疫苗單獨和聯(lián)合免疫小鼠，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗及流式細胞術方法檢測小鼠免疫后所產(chǎn)生的體液和細胞免疫水平，并評估疫苗抗Ⅰ型和Ⅱ弓形蟲攻擊的保護性。
　　結果顯示，在誘導產(chǎn)生體液免疫方面具有優(yōu)勢，相比于重組腺病毒疫苗來說可以誘導產(chǎn)生更高水平的抗體IgG及IgG2a;而重組腺病毒疫苗則能更有效的提高細胞免疫反應水平，誘導產(chǎn)生Th1型細胞因子IL

5、-2，IFN-γ，而且脾細胞增殖增殖水平有明顯提高，流式細胞術檢測脾淋巴細胞分型的實驗結果可以看出T淋巴細胞增多，且以CD8+T細胞亞群為主。在對小鼠使用不同免疫策略進行預防接種的實驗中，結果顯示先DNA疫苗后腺病毒疫苗免疫策略則能夠誘導產(chǎn)生最強的體液免疫和細胞免疫水平。而且這種免疫策略可使小鼠在Ⅰ型RH株弓形蟲速殖子感染時獲得最高的生存率(67％)，并在Ⅱ型PRU株弓形蟲包囊感染時腦內(nèi)包囊形成數(shù)目最低（296±92）。
　　綜上