C型產(chǎn)氣莢膜梭菌保護(hù)性抗原基因的構(gòu)建及其免疫原性研究.pdf

1、C型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起動(dòng)物出血性、壞死性腸炎和腸毒血癥的主要病原菌，特別對(duì)新生仔豬易出現(xiàn)高致病性和高死亡率，嚴(yán)重影響了我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。C型產(chǎn)氣莢膜梭菌的致病因子是菌體產(chǎn)生的外毒素，其中α毒素、β1毒素和β2毒素是其產(chǎn)生的主要外毒素，是引起仔豬紅痢的主要致病因子。 本研究在已經(jīng)構(gòu)建β2-β1融合基因的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步將亞克隆的α毒素基因融合到β2-β1融合基因的上游，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pXETAB2B1，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，進(jìn)行SDS-

2、PAGE和Westernblotting分析，探索了以IPTG為誘導(dǎo)劑優(yōu)化重組菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)的表達(dá)條件，并且進(jìn)行了免疫原性研究，結(jié)果如下： 1.構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒pXETAB2B1經(jīng)酶切反應(yīng)鑒定和核苷酸序列分析表明，核苷酸序列與預(yù)期的序列一致，成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pXETAB2B1。 2.重組菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，其表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western

3、blotting分析，結(jié)果表明，該重組菌株可以表達(dá)α-β2-β1融合蛋白，分子量約為95kD，而且表達(dá)的融合蛋白能夠被C型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗血清特異性識(shí)別。該重組菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)經(jīng)IPTG在不同條件下優(yōu)化表達(dá)，其融合蛋白含量占菌體總蛋白最高比例可達(dá)31﹪。 3.對(duì)重組菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)進(jìn)行了免疫原性研究，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，重組α-β2-β1融合蛋白能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生C型產(chǎn)氣莢膜梭菌的特