嵌合RSV抗原表位的重組流感減毒疫苗的免疫原性及免疫保護性的初步研究.pdf

1、目的：在成功構(gòu)建的三株嵌合RSV抗原表位的重組流感減毒疫苗的基礎(chǔ)上，本研究對其多項指標(biāo)進(jìn)行鑒定，然后對其安全性、免疫原性及免疫保護性進(jìn)行一個初步的研究，從中找到一種高效價株并探討其簡便的免疫接種途徑。
　　 方法：運用血凝、血抑實驗確定是否成功轉(zhuǎn)染出重組流感病毒；通過RT-PCR、SDS-PAGE、間接免疫熒光、電鏡觀察病毒形態(tài)等方法驗證轉(zhuǎn)染出的病毒是否正確；接種雞胚對病毒進(jìn)行擴大培養(yǎng)后經(jīng)蔗糖密度梯度離心純化，TCID50方法測

2、定其病毒滴度；通過動物實驗對其安全性、免疫原性及免疫保護性進(jìn)行一個初步的研究。
　　 結(jié)果：血凝、血抑實驗測得為陽性，表明成功轉(zhuǎn)染出重組流感病毒；經(jīng)RT-PCR鑒定重組病毒基因與質(zhì)粒序列相同，SDS-PAGE電泳鑒定表明流感的主要成分都存在；間接免疫熒光(IFA)檢測表明拯救出的病毒是以A/PR/8/34為骨架的重組病毒；電鏡觀察重組病毒與流感病毒的形態(tài)特征相似；通過蔗糖密度梯度法對重組病毒進(jìn)行純化后，測得RSV-FLU/NS1

3、-F、RSV-FLU/NS1-G和RSV-FLU/NS1-F+G的病毒滴度分別為10-7.82/ml、10-7.5/ml、10-8/ml，10-5TCID50的病毒經(jīng)滴鼻途徑免疫BALB/c小鼠，通過對小鼠肺，鼻，腦中病毒載量的檢測發(fā)現(xiàn)，腦中沒有檢測到病毒，1天后鼻腔檢測不到病毒RSV-FU/NS1-F+G，第3天時檢測不到RSV-FLU/Ns14-F和RSV-FLU/NS1-G，10天后肺部檢測不到病毒，實驗中沒有小鼠死亡，這說明重組

4、病毒在小鼠上是安全的。對BALB/c小鼠鼻腔接種免疫表明：三株重組RSV-FLU/NS1病毒都產(chǎn)生了較高的HI及一定水平的針對RSV的抗體效價，同時也產(chǎn)生了sIgA。IgG1和IgG2a的測定和ELISpot實驗對細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ的分泌性細(xì)胞水平的檢測結(jié)果表明重組病毒可以同時激活機體的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答。小鼠血清中細(xì)胞因子的測定結(jié)果為IL-4和IFN-γ的分泌均比PBS組高。對病毒的免疫保護性評價結(jié)果為RSV-FLU/NS1

5、-F和RSV-FLU/NS1-G重組病毒疫苗對保護小鼠肺損傷具一定的作用，但RSV-FLU/NS1-F+G重組病毒疫苗的保護效果不理想。
　　 結(jié)論：成功轉(zhuǎn)染出三株嵌合RSV抗原表位的重組流感減毒疫苗，經(jīng)鑒定三株減毒疫苗基因組正確。免疫效果評價結(jié)果表明三株減毒疫苗是安全的，并且能夠引起小鼠體內(nèi)的免疫應(yīng)答。其中，RSV-FLU-NS1-F和RSV-FLU/NS1-G重組病毒疫苗對保護小鼠肺損傷具一定的作用，但RSV-FLU/NS1