表皮細胞體外擴增規(guī)律與體內(nèi)成表皮能力的實驗研究.pdf

1、為了更好地為組織工程皮膚臨床應用提供參考與指導,我們研究了表皮細胞的體外擴增以及擴增規(guī)律后細胞的體內(nèi)表皮形成的能力.目的:首先單獨研究表皮細胞的體外擴增規(guī)律,同時比較不同年齡人群的表皮細胞擴增規(guī)律;其次,進一步探索其擴增機制;最后,研究表皮干細胞在表皮組織形成與維持過程中所起的作用.通過上述研究,來闡述表皮細胞體外擴增與體內(nèi)表皮形成的規(guī)律.從而更好地為組織工程皮膚臨床應用提供參考與指導.方法:1.通過細胞計數(shù)、細胞平均直徑測量、克隆染色

2、,觀察不同代次細胞生長規(guī)律,比較不同年齡人群的表皮細胞的生長規(guī)律.2.通過RT-PCR、流式細胞技術(shù),免疫熒光染色分析干細胞表型細胞在各代中的動態(tài)變化.3.借助RT-PCR、流式細胞儀分析等細胞表型檢測技術(shù),比較不同年齡人群原代表皮細胞中干細胞表型體外擴增能力.4.選取包含干細胞表型的已擴增細胞,與藻酸鈣均勻混合后,移植于裸鼠全層皮膚缺損處,同時與不包含干細胞表型的已擴增細胞及不含細胞的空白材料進行對照,對各組裸鼠連續(xù)腹腔注射2周Brd

3、-U,動態(tài)觀察三個實驗組的體內(nèi)表皮形成與維持情況,觀察表皮細胞移植1個月后的Brd-U細胞滯留情況.結(jié)論:人表皮細胞體外擴增能力的維持需要有干細胞表型細胞的存在.不同年齡人原代表皮細胞干細胞表型無統(tǒng)計學差異,是其擴增能力無統(tǒng)計學差異的內(nèi)在原因.是否包含表皮干細胞,對復層表皮組織形成與短期存在無影響,但只有移植的表皮細胞中包含干細胞,所形成的復層表皮才能長期存在.經(jīng)過體外擴增的表皮細胞中的干細胞與體內(nèi)干細胞,在維持組織與自我更新能力方面沒