誘導表皮干細胞重建汗腺的實驗研究.pdf

1、皮膚汗腺分泌汗液,汗液在蒸發(fā)過程中帶走身體熱量.極少數(shù)人的汗腺缺失是由于基因、遺傳等先天因素引起,但絕大部分汗腺損失的原因是各種原因導致的皮膚缺損.缺損的皮膚組織被疤痕組織替代修復,但汗腺組織難以自然再生.因此,當汗腺缺失范圍達到體表面積一定比例時,皮膚的體溫調節(jié)功能出現(xiàn)障礙.人工皮膚在加快創(chuàng)面愈合速度,減少疤痕形成等方面優(yōu)勢明顯,而且己實現(xiàn)商品化.然而,最接近自然的人工皮膚,也僅具有表皮、真皮層結構,無汗腺及其它皮膚附屬器.實現(xiàn)汗腺人

2、工構建,是目前組織工程及皮膚科學領域中都需解決的問題. 目的： 本研究希望通過模擬胚胎發(fā)育時期,汗腺發(fā)生所必需的條件,探索重建汗腺的可能性. 方法： 1.根據(jù)細胞體積大小及細胞表面標志,富集純化表皮干細胞. 2.體外培養(yǎng)條件下應用表皮生長因子 (EGF),探索體外誘導表皮干細胞向汗腺上皮分化可行性. 3.控制細胞外溶液Ca<'2+>濃度與作用時間,借助細胞粘合系統(tǒng)(CellAdhesion

3、 System,CAS) 介導表皮干細胞聚集.并觀察各種不同聚集方式對細胞干細胞表型以及汗腺細胞表型的影響. 4.以EGF對聚集的表皮干細胞進行三維誘導培養(yǎng),研究在均一濃度以及梯度濃度誘導條件下,EGF對表皮干細胞形成類汗腺組織結構的影響. 5.優(yōu)化干細胞誘導以及組織結構發(fā)生條件,在免疫缺陷動物體內嘗試汗腺重建. 結果： 表皮干細胞在EGF濃度為20ng/ml平面誘導條件下,以及EGF濃度為10ng/ml

4、三維立體誘導條件下,可以被誘導表達汗腺上皮細胞表型.而且,在EGF濃度為20ng/ml誘導條件下,三維立體誘導的表皮干細胞比二維平面誘導的表皮干細胞更早表達汗腺細胞表型mRNA.在Transwell中三維立體培養(yǎng)條件下EGF可形成非線性的濃度梯度,富集的表皮干細胞聚合體在三維立體培養(yǎng)條件下,向高濃度EGF區(qū)域遷移,形成汗腺導管樣結構. 結論： 通過上述研究,我們發(fā)現(xiàn)通過體外模擬胚胎發(fā)育時期,汗腺發(fā)生所需的條件,表皮干細胞