小鼠脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.pdf

1、脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ASCs)是脂肪組織中存在的一種成體干細(xì)胞，具有便于取材，可向三個胚層方向分化等優(yōu)點。本實驗主要研究ASCs的體外分離培養(yǎng)條件優(yōu)化；ASCs向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、精子細(xì)胞的誘導(dǎo)分化；Reversine對ASCs生物學(xué)特性的影響。
　　通過MTT、免疫組化及RT-PCR證明，分離培養(yǎng)的ASCs在35代內(nèi)保持良好的生物學(xué)特性，P5、P15、P25細(xì)胞倍增時間分別為34.

2、6 h、37.8 h、38.3 h；持續(xù)表達(dá)細(xì)胞表面抗原CD29、CD44，不表達(dá)造血干細(xì)胞特異表面抗原CD45；表達(dá)特異性基因CD29、CD34、CD90、Sca-1、c-Myc，不表達(dá)Sox-2和Oct-4。說明本實驗采用的ASCs的分離培養(yǎng)方法能夠保持ASCs的未分化狀態(tài)。
　　ASCs在成脂誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)下分化為脂肪細(xì)胞，誘導(dǎo)第六天油紅O染色計算P5
　　ASCs誘導(dǎo)率為78.3％±9.2％，P15 ASCs誘導(dǎo)率為73

3、.9％±8.7％，P25 ASCs誘導(dǎo)翠為67.0％±1.52％，不同代數(shù)間誘導(dǎo)率無顯著性差異；在成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)下分化為成骨細(xì)胞，第11天進(jìn)行茜素紅染色，鈣結(jié)節(jié)被染成深紅色，放大100倍視野下計數(shù)被染色的鈣結(jié)節(jié)數(shù)量，P5 ASCs為15±2.4個，P15 ASCs為13±3.6個，不同代數(shù)之間無顯著性差異；P5 ASCs與睪丸組織共培養(yǎng)，10天后RT-PCR結(jié)果顯不表達(dá)精子細(xì)胞特異基因Prm1、Acr。
　　Reversine終濃

4、度大于5μmol/L時對ASCs有明顯的細(xì)胞毒性，濃度為1μmol/L時，對ASCs的增殖率無明顯影響，但可以顯著增加ASCs向脂肪細(xì)胞，成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的效率。
　　本實驗建立了ASCs分離培養(yǎng)體系，ASCs可以在此體系內(nèi)長期培養(yǎng)并保持良好的生物學(xué)特性；證明了ASCs具有在適當(dāng)誘導(dǎo)條件下向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞以及精子細(xì)胞分化的潛能；同時證明了reversine可以提高ASCs向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)分化率，是一種有效的提高AS