次聲對人系白血病細胞HL-60細胞的生物學效應.pdf

1、研究背景：次聲，為頻率10<'-4>～20 Hz的彈性波，是由物體的機械振動產(chǎn)生的。其特點還包括：低頻波長，傳播過程中不易被吸收，衰減甚小，傳播遠，穿透力強等。 次聲是以生物共振的方式普遍地作用于生物體的各器官和組織，因而可產(chǎn)生廣泛的生物學效應，涉及系統(tǒng)、器官、組織、細胞以至分子水平。次聲的影響與聲壓、頻率及作用時間相關。在次聲對機體的作用機制中，細胞結構和功能的原發(fā)性損傷占有重要地位。在以往的研究中表明，一定聲壓級水平的次聲能

2、造成生物體損害，損害與聲壓級成正比關系。目前的研究大多集中于次聲對正常組織、細胞的損傷方面。 近年有學者發(fā)現(xiàn)，在較弱的次聲作用下，可伴有機體抗氧化系統(tǒng)酶活性增強，代償反應增高。由此可見，次聲在疾病診療方面有很大的開發(fā)潛力。研究低聲壓級、小劑量的次聲對機體的作用，將為進一步探討和利用次聲的有益作用維護身體健康，治療某些疾病開辟新的途徑。 次聲一方面可以造成系統(tǒng)功能及結構損害，另一方面在安全范圍內已應用于臨床治療，其應用前景

3、不可限量。美國CHI公司的INFRASOUND 8<'TM>次聲治療儀，作為小型次聲發(fā)聲裝置，可產(chǎn)生4～20 Hz，79.75～86.11 dB的安全范圍內的次聲，為次聲應用提供了研究基礎。國內目前無應用次聲治療儀作用于離體細胞的實驗室研究。因此，次聲發(fā)聲裝置對體外細胞的生物學效應的研究，對次聲的治療應用具有重要影響。 目的：研究次聲治療儀對人白血病細胞株HL-60的生物學效應，為次聲應用于臨床提供實驗室依據(jù)。 材料與方

4、法：采用美國CHI公司的INFRASOUND 8<'TM>次聲治療儀作為信號源發(fā)聲裝置；常規(guī)培養(yǎng)HI-60細胞于含10％滅活新生牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中。次聲組：培養(yǎng)皿置于超凈臺中的次聲治療儀下，發(fā)射頭距液面均為1.5鋤～2.0 cln，使用最強檔位(檔位3)；對照組：次聲治療儀處于關閉狀態(tài)，其余處理同次聲組；分別在實驗處理的15 min、30 min、60 min、90 min、120 min取樣檢測，再分別培養(yǎng)24 h、4

5、8 h后分別進行檢測；實驗重復3次。實驗觀察指標包括：臺盼藍活細胞計數(shù)，MTT 比色法，流式細胞儀技術，熒光染色法及掃描電鏡法，觀察比較HL-60細胞活力的影響和形態(tài)學改變。 結果： 1細胞活力影響情況 1.1 臺盼藍染色法結果示作用組和對照組細胞的1 5 min、30 min、60 min、90 min和120 min各組在實驗處理的0 h、24 h、48 h細胞均顯持續(xù)增長狀態(tài)。次聲組較對照組比較無統(tǒng)計學差異(

6、P>0.05)。實驗過程中各組被染細胞極少，細胞存活率均達到95％以上。 1.2 噻唑蘭染色法(MTT法)隨著次聲作用及空氣暴露時間的增加，細胞次聲組較對照組OD值略有降低，但次聲組及對照組比較無統(tǒng)計學差異。次聲組和對照組、培養(yǎng)時間、處理時間各項間均無交互效應。培養(yǎng)24 h、48 h無差異性改變(P>0.05)。 1.3流式細胞技術Annexin V-EGFP/PI熒光標記雙染兩組細胞在實驗處理120 min后分別培養(yǎng)2

7、4 h、48 h進行檢測。每組細胞樣本中活細胞均約90％，細胞總凋亡率均約10％，且各組比值差異不明顯。將細胞的早期凋亡率、晚期凋亡率、總凋亡率各項分別進行統(tǒng)計學分析，次聲組與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 2．細胞形態(tài)學影響 2.1 熒光染色法光鏡下觀察到，兩組細胞生長狀態(tài)良好，形態(tài)完整性好，未見細胞破碎或皺縮。對照組細胞顯示為均勻的淡藍色，未見亮藍色或核形態(tài)學變化。次聲組顯示為均勻的淡藍色，個別細胞呈強藍色

8、熒光，但未見明顯核固縮、核碎裂等PCD形態(tài)學變化。 2.2 掃描電鏡法可見對照組細胞表面褶皺較多，膜表面不平整，膜絨毛致密并清晰。單個細胞放大可見表面微絨毛致密緊湊，纖毛完整。次聲作用組細胞大小一致性較好，未見細胞變形、破裂。但細胞表面褶皺減少明顯，膜表面微絨毛較稀疏，個別細胞可呈現(xiàn)膜表面光滑，無褶皺的球狀。 結論：次聲作用HL-60細胞在本實驗的120 min內，對細胞的增殖能力及細胞活性未見明顯影響，次聲對細胞的凋亡