2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin,CRT)高表達(dá)對二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞分化的影響以及與分化相關(guān)的分子機(jī)制。
  方法:運(yùn)用RT-PCR、Western blot實驗方法觀察DADS作用HL-60細(xì)胞后CRT和其相關(guān)分子C/EBPα的變化情況。通過構(gòu)建CRT高表達(dá)質(zhì)粒,將CRT高表達(dá)質(zhì)粒 pcDNA3.1-12GS0643-IG-3轉(zhuǎn)入 HL-60細(xì)胞內(nèi)

2、,探討 CRT對DADS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的影響。通過NBT還原實驗、MTT比色法、Transwell實驗進(jìn)一步觀察CRT高表達(dá)和DADS作用對HL-60細(xì)胞還原能力、增殖能力及遷移、侵襲能力的影響。
  結(jié)果:
  1.DADS對人白血病HL-60細(xì)胞CRT表達(dá)的影響
  Western blot、RT-PCR實驗數(shù)據(jù)表明,以濃度為1.25 mg·L-1DADS分別作用HL-60細(xì)胞12h、24h、48h后,同未

3、用DADS處理組相對比,隨著DADS處理時間的延長,CRT在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)呈逐漸下降的特點(P<0.05)。
  2. DADS對HL-60細(xì)胞C/EBPα表達(dá)的影響
  Western blot、RT-PCR實驗數(shù)據(jù)表明,以濃度為1.25 mg·L-1DADS分別作用HL-60細(xì)胞12h、24h、48h后,同不用DADS處理組相對比,隨著DADS處理時間的延長, C/EBPα在 mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)呈

4、逐漸升高的特性(P<0.05)。
  3. DADS對HL-60細(xì)胞遷移能力的影響
  遷移實驗表明,用DADS分別作用人白血病HL-60細(xì)胞12、24h后,使其終濃度為1.25 mg·L-1,同未用DADS處理組相比較,HL-60細(xì)胞的遷移能力隨時間的延長而逐漸減弱(P<0.05)。
  4. CRT高表達(dá)對DADS作用HL-60細(xì)胞CRT表達(dá)的影響
  將質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染 HL-60細(xì)胞,置于二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中

5、培養(yǎng)48h后,置于熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果,可見細(xì)胞發(fā)綠色熒光,表明轉(zhuǎn)染成功。
  RT-PCR實驗結(jié)果顯示,CRT高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HL-60細(xì)胞CRT基因水平與轉(zhuǎn)染陰性質(zhì)粒組相比升高,且在DADS作用后,各實驗組的CRT基因水平與未處理時相比均有所下降。
  Western blot顯示,轉(zhuǎn)染CRT高表達(dá)質(zhì)粒的HL-60細(xì)胞其CRT蛋白表達(dá)水平與陰性轉(zhuǎn)染組相比升高,用1.25 mg·L-1DADS處理各實驗組后,各組的CR

6、T蛋白水平與未處理時相比均有所下降。
  RT-PCR與Western blot表明,1.25 mg·L-1DADS處理陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組和高表達(dá)組48h后,CRT的mRNA和蛋白表達(dá)水平跟未處理的陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組和高表達(dá)組比較均明顯降低(P<0.05)。表明高表達(dá)CRT mRNA和蛋白水平均高于陰性轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組,且DADS能抑制CRT表達(dá)。
  5. CRT高表達(dá)對DADS作用HL-60細(xì)胞C/EBPα表

7、達(dá)的影響
  將CRT高表達(dá)質(zhì)粒和陰性質(zhì)粒分別瞬時轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后,于熒光顯微鏡下觀察,能看到轉(zhuǎn)染細(xì)胞發(fā)綠色熒光,說明轉(zhuǎn)染成功。
  RT-PCR實驗顯示,CRT高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HL-60細(xì)胞C/EBPα基因水平與轉(zhuǎn)染陰性質(zhì)粒組相比下降,且在DADS作用后,各實驗組的C/EBPα基因水平與未處理時相比均有所升高。
  Western blot顯示,轉(zhuǎn)染CRT高表達(dá)質(zhì)粒的HL-60細(xì)胞其C/E

8、BPα蛋白表達(dá)水平與陰性轉(zhuǎn)染組相比下降,用1.25 mg·L-1DADS處理各實驗組后,各組的CRT蛋白水平與未處理時相比均有所升高。
  RT-PCR與Western blot表明,1.25 mg·L-1DADS處理陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組和高表達(dá)組48h后,C/EBPα的mRNA和蛋白表達(dá)水平跟未處理的陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組和高表達(dá)組比較均明顯增高(P<0.05)。表明 CRT高表達(dá)組C/EBPα miRNA和蛋白水平均低于

9、陰性轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組,且DADS能增加C/EBPα表達(dá)。
  6. CRT高表達(dá)對DADS作用HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)其分化的影響
  NBT實驗顯示,在各時間段,CRT高表達(dá)組還原能力均弱于陰性轉(zhuǎn)染組(P<0.05),分別用1.25mg L-1DADS和ATRA處理CRT高表達(dá)HL-60細(xì)胞,較未處理前相比,細(xì)胞的還原能力明顯增強(qiáng)(P<0.05),其中1.25mg L-1 DADS與ARTA比較其效果類似(P>0.05)。

10、>  MTT實驗顯示,經(jīng)DADS處理后,CRT高表達(dá)組、陰性轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖與處理前相比均受到抑制(P<0.05),表明DADS能抑制HL-60細(xì)胞的增殖。
  Transwell侵襲實驗表明,同未處理的CRT高表達(dá)組、陰性轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組相比,經(jīng) DADS處理后的各組穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)比處理前均明顯減少(P<0.05);未轉(zhuǎn)染組和陰性轉(zhuǎn)染組無明顯差異(P>0.05)。表明DADS能對HL-60細(xì)胞的侵襲能力產(chǎn)生抑制作用

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