葛根總黃酮誘導(dǎo)急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【背景與目的】
　　 葛根是南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科原創(chuàng)制劑“血復(fù)康”的主要成分之一。課題組先期的研究已經(jīng)證實(shí)葛根主要有效活性成分葛根總黃酮(Puerariaeradixflavones，PRF)在50μg/ml～200μg/ml的濃度范圍內(nèi)對(duì)NB4、Kasumi-1、HL-60、U937四種急性白血病細(xì)胞株有選擇性增殖抑制作用。對(duì)于HL-60細(xì)胞觀察到較低濃度葛根總黃酮（50μg/ml）可能促進(jìn)急性髓系白血病(acut

2、emyeloidleukemia，AML)細(xì)胞株HL-60細(xì)胞的增殖，較高濃度（200μg/ml）葛根總黃酮?jiǎng)t誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡。本研究擬以≤50μg/mlPRF處理HL-60細(xì)胞株，探討該濃度的PRF對(duì)HL-60細(xì)胞可能的分化作用。
　　 【方法】
　　 1)10～100μg/mlPRF處理HL-60細(xì)胞24、48及72小時(shí)，MTT法檢測(cè)HL-60細(xì)胞的增殖抑制率，篩選PRF最佳工作濃度。
　　 2)10、

3、30、50μg/mlPRF處理HL-60細(xì)胞48小時(shí)，瑞氏染色法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，檢測(cè)細(xì)胞NBT積分。
　　 3)10、30、50μg/mlPRF處理HL-60細(xì)胞48小時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分化抗原CD11b、CD14、CD15、CD13及CD33；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期進(jìn)程。
　　 【結(jié)果】
　　 10、30、50μg/mlPRF可抑制HL-60細(xì)胞的增殖：瑞氏染色法表明：HL-60細(xì)胞經(jīng)過(guò)PRF處理后

4、，部分細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)分化特征；細(xì)胞周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：PRF使細(xì)胞G0-G1期比例增加，S期比例減少，影響細(xì)胞周期進(jìn)程；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分化抗原發(fā)現(xiàn)：PRF處理后的HL-60細(xì)胞表面分化抗原CD11b、CD15表達(dá)增加，CD14低表達(dá)，CD33表達(dá)下降，CD13表達(dá)無(wú)明顯變化；NBT實(shí)驗(yàn)顯示：藥物作用后的細(xì)胞中出現(xiàn)藍(lán)紫色顆粒，NBT積分隨藥物濃度增加而升高。
　　 【結(jié)論】
　　 較低濃度PRF（10、30、50μg/ml