IgA腎病發(fā)病機制與腭扁桃體關(guān)系研究.pdf

1、IgA腎病(IgAN)是一類以腎小球系膜區(qū)IgA沉積為特征的常見腎小球疾病。有許多關(guān)于扁桃體與IgAN發(fā)病機制之間關(guān)系的報道。一些研究表明腎小球沉積的以雙聚體或多聚體IgA為主，雙聚體或多聚體IgA至少部分來源于扁桃體。Atkin等研究表明J鏈?zhǔn)荌gA形成二聚體或多聚體所必需的，而IgM形成多聚體則否。單體IgA免疫復(fù)合物不易在腎臟沉積，而二聚體或多聚IgA免疫復(fù)合物在腎內(nèi)卻易沉積。刺激IgA腎病患者扁桃體后常常出現(xiàn)尿檢異常加重，扁桃體

2、摘除能改善某些病人尿檢異常并維持穩(wěn)定的腎功能，能減輕系膜增生和IgA沉積，但確切的機理不清楚。我們分離鑒定了IgAN病人及非腎炎慢性扁桃體病人的扁桃體細(xì)菌，發(fā)現(xiàn)兩組病人細(xì)菌譜及數(shù)量無明顯差異，均以甲型鏈球菌為多，推測IgAN發(fā)病機制與扁桃體免疫反應(yīng)有關(guān)。研究表明CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞能維持自身耐受，預(yù)防自身免疫疾病的發(fā)生。剔除少部分CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞即會發(fā)生器官特異性自身免疫性疾病，補

3、充CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞能預(yù)防特異性自身免疫性疾病的發(fā)生，Powrie等報道輸注CD<,4><'+>CD<,25<'+>細(xì)胞預(yù)防炎癥免疫性腸疾病的發(fā)生，甚至逆轉(zhuǎn)已建立的胃腸免疫性炎癥模型。CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞幾乎是人類所有器官特異性自身免疫性疾病、移植免疫疾病及過敏性疾病的動物模型的調(diào)節(jié)者。目前，尚無關(guān)于CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞和IgAN之間關(guān)系的研究資料。一些慢性

4、扁桃體炎病人沒有腎臟病變，提示有某種因素維持機體免疫和耐受之間的穩(wěn)定；而某些慢性扁桃體炎病人同時患有IgAN，推測這些IgAN病人扁桃體內(nèi)CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞數(shù)量可能有所減少或其抑制活性有所下降，導(dǎo)致雙聚體或多聚體IgA分泌增多。 本文主要以扁桃體隱窩內(nèi)甲型鏈球菌(HS)滅活菌株刺激IgAN病人組和非腎炎病人組扁桃體淋巴細(xì)胞，觀察未刺激及刺激后CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞和分泌J鏈Ig

5、A細(xì)胞數(shù)量：將扁桃體淋巴細(xì)胞與HS混和培養(yǎng)液上清培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞，觀察IgAN病人組及對照組培養(yǎng)液上清對腎小球系膜細(xì)胞產(chǎn)細(xì)胞因子的影響；以培養(yǎng)液上清輸注給免疫的Sprague—Dawley(SD)大鼠，觀察IgAN病人組及對照組培養(yǎng)液上清對其尿紅細(xì)胞，尿蛋白及病理變化的影響；探討IgAN的發(fā)病機制。 第一部分扁桃體滅活HS菌株對IgA腎病腭扁桃體CD<,4><'+>CD<,25><'+>及J鏈IgA細(xì)胞數(shù)的影響 目的

6、:以腭扁桃體隱窩內(nèi)甲型鏈球菌(HS)滅活菌株刺激IgA腎病(IgAN)病人組和非腎炎病人組(對照組)扁桃體淋巴細(xì)胞，觀察未刺激及刺激后CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞和分泌J鏈IgA細(xì)胞數(shù)量，探討IgAN的發(fā)病機制。 方法: ①收集37例IgAN病人及37例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術(shù)摘除的扁桃體； ②分離鑒定兩組病人腭扁桃體隱窩內(nèi)細(xì)菌及腭扁桃體淋巴細(xì)胞； ③(兩組病人腭扁桃體隱窩內(nèi)細(xì)菌以HS

7、最多)，以HS的滅活菌株體外刺激培養(yǎng)扁桃體淋巴細(xì)胞72小時； ④以流式細(xì)胞儀檢測扁桃體淋巴細(xì)胞中CD<,4><'+>CD<,25><'+>細(xì)胞數(shù)，以原位雜交技術(shù)檢測J鏈mRNA表達(dá)，以免疫熒光及熒光原位雜交技術(shù)同步分析分泌J鏈mRNA陽性IgA細(xì)胞。 結(jié)果: ①未刺激、非腎炎病人HS(對照組HS)、IgAN組HS刺激后CD<'+><,4>CD<,25><'+>細(xì)胞數(shù)(0.984-0.204％vs 3.58±0.5

8、54％，1.37±0.214％vs5.78±0.562％，and 1.43±0.202％vs 6.05±0.521％)，IgAN組與對照組比較，前者均顯著低于后者。HS對IghN組CD<'+><,4>CD<,25><'+>細(xì)胞的刺激指數(shù)(SI)顯著低于對照組。 ②未刺激、對照組HS、IgAN組HS刺激后J鏈mRNA陽性ZgA細(xì)胞(11.9±3.1％vs 6.5±1.5％，33.5±5.7％vs13.9±1.2％and 35.1±

9、6.2％vs 13.9±1.2％)，IghN組與對照組相比，前者均顯著高于后者。HS對IgAN病人組J鏈mRNA陽性IgA細(xì)胞的SI顯著高于對照組。 ③HS對CD<'+><,4>CD<,25><'+>細(xì)胞的SI與對分泌J鏈Igh細(xì)胞的SI呈顯著性負(fù)相關(guān)。 結(jié)論:IgAN病人腭扁桃體CD<'+><,4>CD<,25><'+>細(xì)胞減少和分泌J鏈IgA細(xì)胞增多可能與IgAN的發(fā)病機制有關(guān)。 第二部分 IgAN病人腭扁桃

10、體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清體外培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞PAI-1，IL-6，TGF-β1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響 目的:研究腭扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清體外培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞PAI-1，IL-6，TGF一β1mRNA和蛋白表達(dá)的影響。 方法:以一定量的扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清體外培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞24小時，應(yīng)用實時定量熒光PCR檢測TGF—β1mRNA的表達(dá)，RT—PCR檢測IPAI—Im

11、RNA，IL-6mRNA的表達(dá)，應(yīng)用ELISA檢測PAI-1，IL-6蛋白的表達(dá)，Western blotting檢測TGF—β1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:與對照組培養(yǎng)相比，IgAN病人組扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清體外培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞PAI-1，IL-6，TGF-β1mRNA和蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論:IgAN病人腭扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清能上調(diào)人腎小球系膜細(xì)胞PAI-1，IL-6，

12、TGF-β1mRNA和蛋白表達(dá)。 第三部分IgAN病人腭扁桃體淋巴細(xì)胞與體外HS混和培養(yǎng)液清對免疫大鼠病理變化的影響 目的:研究腭扁桃體淋巴細(xì)胞與Hs體外混和培養(yǎng)液上清對免疫大鼠尿紅細(xì)胞，尿蛋白及病理變化的影響。 方法: ①給雄性SD大鼠每天口服0.1％牛血清白蛋白(BSA)酸化水(6 mM HCl)8周。 ②第8周末，將一定量的扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)上清經(jīng)尾靜脈連續(xù)3天輸注給上述已免疫

13、的雄性SD大鼠。 ③第8周末及連續(xù)尾靜脈注射的3天，收集大鼠的尿液，檢測尿紅細(xì)胞及尿蛋白。 ④連續(xù)尾靜脈注射3天后，斷頸處死大鼠，取大鼠腎組織。 ⑤應(yīng)用免疫熒光檢測腎組織IgA的沉積。 ⑥HE染色及PAS染色觀察腎組織病理形態(tài)變化。 結(jié)果:與接受對照組腭扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清的大鼠相比，接受IgAN組扁桃體淋巴細(xì)胞與HS體外混和培養(yǎng)液上清的大鼠，血尿，蛋白尿，腎小球系膜區(qū)IgA沉積