IgA腎病病人腭扁桃體單個核細胞免疫狀態(tài)及相關機制研究.pdf

1、IgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)是以腎小球系膜區(qū)IgA沉積為特征的最常見的原發(fā)性腎小球疾病。約占我國原發(fā)性腎小球疾病的40％～47％。該病發(fā)病率高，長期的隨訪發(fā)現(xiàn)IgA腎病是慢性進展的疾病，10～20年后約50％患者進入終末期腎功能衰竭（尿毒癥），是導致終末期腎功能衰竭的最主要原發(fā)性腎小球疾病。
　　 目前研究發(fā)現(xiàn)，約40％以上的IgAN患者表現(xiàn)為上呼吸道感染（包括扁桃體炎）后癥狀發(fā)作或加重，而切除扁桃體后

2、能明顯改善尿檢異常，有效降低循環(huán)中高IgA水平，重復腎活檢顯示，系膜區(qū)沉積的IgA強度減弱，通過超過10年的隨訪發(fā)現(xiàn)扁桃體摘除組患者腎臟長期存活率明顯高于非扁桃體手術組患者，提示扁桃體免疫可能在IgAN發(fā)病機制中起重要作用。
　　 很多證據(jù)表明IgA腎病患者存在IgA產生的異常，血清IgA水平升高，循環(huán)IgA免疫復合物增加，外周血中分泌IgA的細胞增多，體外培養(yǎng)時外周血單個核細胞IgA產生異常，都提示IgA產生增多可能是IgA腎

3、病發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。
　　 Suzuki S等發(fā)現(xiàn)副流感嗜血桿菌蛋白刺激使扁桃體單個核細胞增殖更明顯，IgA、IgA1水平明顯升高。葡萄球菌M蛋白刺激上調IgAN扁桃體淋巴細胞TGF-β的產生，誘導分泌IgA的漿細胞增多?？滤_奇B4病毒反復注射小鼠可以誘導與IgA腎病類似的系膜區(qū)IgA和病毒基因的沉積。提示IgA腎病的發(fā)生與上呼吸道尤其是扁桃體對環(huán)境中存在的細菌或病毒抗原的粘膜免疫反應異常有關。
　　 前期我們分離鑒定了3

4、7例IgA腎病病人和37例非腎炎慢性扁桃體炎病人的扁桃體隱窩細菌，發(fā)現(xiàn)兩組之間細菌譜和數(shù)量無明顯差異；所有病人均檢測到甲型鏈球菌(α-Hemolytic streptococcus，HS)。來源于IgA腎病組和慢性扁桃體炎組的甲型鏈球菌滅活菌株刺激IgA腎病扁桃體淋巴細胞促進J鏈mRNA陽性IgA細胞數(shù)增多。
　　 因此我們選擇甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖體外刺激模擬上呼吸道感染對IgA腎病病人扁桃體單個核細胞的刺激作用。探討

5、
　　 1.IgA腎病組病人扁桃體單個核細胞增殖和IgA及IgA1的產生。
　　 2.IgA腎病病人扁桃體B淋巴細胞Iα-Cα胚系轉錄本(Iα-Cα germline transcript)、激活誘導的胞嘧啶脫氨酶(activation induced cytidine deaminase;AID)mRNA的表達。
　　 3.IgA腎病病人扁桃體單個核細胞Th細胞因子IFN-γ、IL-4基因和蛋白表達。
　

6、　 4.IgA腎病病人扁桃體單個核細胞IgA受體FcαRI表達及甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖刺激下FcαRI表達的變化。
　　 第一章 IgA腎病病人扁桃體單個核細胞增殖和IgA及IgA1的產生
　　 目的：
　　 體外模擬上呼吸道感染對扁桃體單個核細胞的刺激作用，觀察不同濃度滅活甲型鏈球菌菌株、細菌脂多糖對IgA腎病病人扁桃體單個核細胞增殖的影響。觀察滅活甲型鏈球菌菌株、細菌脂多糖對IgA腎病病人扁桃體單個

7、核細胞分泌IgA、IgA1的影響。
　　 方法：
　　 1.收集26例IgAN病人及25例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術摘除的扁桃體
　　 2.分離培養(yǎng)兩組病人腭扁桃體單個核細胞
　　 3.制備甲型鏈球菌滅活菌株
　　 4.MTT檢測不同濃度甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖對扁桃體單個核細胞增殖的影響
　　 5.甲型鏈球菌滅活菌株、脂多糖刺激體外培養(yǎng)扁桃體單個核細胞72小時后收集細胞培養(yǎng)上清液，

8、ELISA檢測IgA、IgA1的表達。
　　 結論：
　　 1.未刺激和脂多糖刺激后，IgA腎病組較非IgA腎病組扁桃體單個核細胞增殖更明顯。
　　 2.甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖刺激后，IgA腎病組扁桃體單個核細胞IgA、IgA1產生明顯增加。
　　 3.甲型鏈球菌滅活菌株刺激后IgA腎病組扁桃體單個核細胞體外培養(yǎng)上清液IgA1/IgA比例上升。
　　 提示IgA腎病患者的扁桃體免疫可能存在

9、過高的應答狀態(tài)導致IgA產生增多。
　　 第二章IgA腎病病人扁桃體單個核細胞IgA類別轉換相關基因的研究
　　 目的：
　　 研究IgAN組與對照組扁桃體單個核細胞IgA類別轉換相關基因表達水平。從基因水平探討IgAN組扁桃體單個核細胞IgA產生異常的分子機制。
　　 方法：
　　 1.收集IgAN病人及非腎炎慢性扁桃體炎病人手術摘除的扁桃體。
　　 2.分離兩組病人扁桃體單個核細胞并提

10、取細胞總RNA。
　　 3.實時定量熒光PCR檢測Iα-Cα胚系轉錄本(Iα-Cα germline transcript)、激活誘導的胞嘧啶脫氨酶(AID) mRNA的表達。
　　 結論：
　　 IgA腎病病人扁桃體單個核細胞Iα-Cα胚系轉錄本、激活誘導的胞嘧啶脫氨酶(AID)基因表達水平上調；可能與IgA腎病病人扁桃體IgA產生異常有關。
　　 第三章 IgA腎病病人扁桃體單個核細胞細胞因子IFN-

11、γ、IL-4表達的研究
　　 目的：
　　 觀察甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖刺激下IgA腎病扁桃體單個核細胞培養(yǎng)上清液IFN-γ，IL-4表達的變化。研究IgAN組與對照組扁桃體單個核細胞IFN-γ、IL-4基因表達水平。
　　 方法：
　　 1.收集26例IgAN病人及25例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術摘除的扁桃體。
　　 2.分離培養(yǎng)兩組病人扁桃體單個核細胞。
　　 3.實時定量熒光P

12、CR檢測IFN-γ、IL-4mRNA的表達。
　　 4.甲型鏈球菌的滅活菌株、細菌脂多糖刺激體外培養(yǎng)扁桃體單個核細胞72小時后收集細胞培養(yǎng)上清液，ELISA檢測IFN-γ、IL-4的表達。
　　 結論：
　　 1、IgA腎病扁桃體單個核細胞細胞因子IFN-γ、IL-4分泌增加和基因表達水平上調。
　　 2、甲型鏈球菌滅活菌株刺激下IgA腎病扁桃體分泌IFN-γ下調；IL-4上調。
　　 3、細菌脂

13、多糖刺激下IgA腎病扁桃體分泌IFN-γ和IL-4上調。
　　 提示IgA腎病扁桃體Th細胞因子表達上調，在適應性免疫應答中Th2細胞因子占優(yōu)勢，可能參與IgAN的發(fā)生，發(fā)展。
　　 第四章IgA腎病病人扁桃體單個核細胞IgA受體Fcα RI表達研究
　　 目的：
　　 研究IgAN組與對照組扁桃體單個核細胞IgA受體FcαRI表達水平。觀察甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖刺激下IgA腎病扁桃體單個核細胞I

14、gA受體Fcα RI表達的變化。
　　 方法：
　　 1.收集26例IgAN病人及25例非腎炎慢性扁桃體炎病人手術摘除的扁桃體。
　　 2.分離培養(yǎng)兩組病人扁桃體單個核細胞
　　 3.實時定量熒光PCR檢測FcαRImRNA的表達
　　 4.甲型鏈球菌滅活菌株、細菌脂多糖刺激體外培養(yǎng)扁桃體單個核細胞72小時，流式細胞儀檢測扁桃體單個核細胞Fcα RI陽性細胞數(shù)
　　 結論：