骨基質明膠臨床植入的免疫相關因子檢測研究（IFN-r、TGF-β1和GM-CSF）.pdf

1、本研究進行多項細胞因子，包括白介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、轉化生長因子-β1(TGF-β1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)等檢測，評估BMG臨床植入后的體液免疫狀態(tài)，進而了解BMG的抗原性，用于排斥反應的早期診斷，并希望由此發(fā)現(xiàn)某些特定的細胞因子是BMG的免疫標志物，為BMG替代自體骨移植打下堅實的理論基礎。 研究方法：本

2、研究分為兩個部分，第一部分為“BMG修復骨缺損”，第二部分是“細胞因子的檢測和分析”。 1.臨床應用BMG修復骨缺損 1.1.BMG的制備：按照Urist方法改良后制成兩種，一種為條桿型，另一種為顆粒型，由我院骨科實驗室制成分裝，鈷60(Co60)滅菌，貯存于-18℃待用。 1.2.BMG的掃描電鏡(SEM)觀測：垂直和平行膠原纖維走向作切面，制備試片、金屬鍍膜，在JSMT300型掃描電鏡下觀察BMG哈佛氏管及骨

3、陷窩的超微結構。 1.3.使用方法：使用前按無菌操作將備用的BMG從包裝中取出，浸泡于75％酒精15-30分鐘，取出用生理鹽水沖洗后即可植入。 1.4.使用例數(shù)：20例 1.5.適應征：既往健康，青壯年患者的骨折不愈合或延遲愈合。 2.細胞因子的檢測和分析 2.1.檢測時間：在BMG植入術前、術后1周、2周，分別采取血樣2ml。血清樣品可存于-20℃?zhèn)溆谩?2.2.本研究進行多項細胞因子檢

4、測，本人參與并負責以下三種檢測：IFN-r、TGF-β1、GM-CSF。檢測方法：酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)(美國Endogen公司進口產品)。ELISA：以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。實驗過程為：樣品/標準品孵育準備—(或加生物素)—加結合物與目的因子結合—加底物著色—加終止液停止反應—讀取分光光度計450nm波長吸光度值(OD值)—根據直線回歸方程標準曲線

5、得出其含量。 2.3每.一例BMG植入后均觀測術后1周的體溫變化，皮膚有無炎癥反應及過敏反應，局部淋巴結、脾臟是否腫大等改變，檢查血常規(guī)，注意傷口愈合等級，有無明顯腫脹、滲出，對滲出液進行細菌培養(yǎng)、涂片。 2.4本.研究為植入BMG前后進行自身對照比較的小樣本配伍組設計(隨機區(qū)組設計)，可對所有測得的每組數(shù)據，運用SAS6.12版軟件，進行統(tǒng)計學分析；得出均數(shù)和標準差，以X±S表示；進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗；如資料符

6、合正態(tài)性分布，方差齊，宜進行方差分析并兩兩比較；如資料不符合上述參數(shù)統(tǒng)計分析的的要求，可予隨機區(qū)組設計的秩和檢驗；P＜0.05時有統(tǒng)計學意義。 研究結果： 1.BMG植入術后臨床觀測結果：應用BMG20例，均為骨折愈合障礙、骨缺損病例。所有病例術后5d內體溫在37.4℃-38.5℃，5d后體溫恢復正常。1例術后傷口滲出、分泌物，培養(yǎng)未見細菌生長；19例傷口均甲級愈合，未見皮膚紅腫、發(fā)熱、滲出等炎癥反應及皮疹、紅斑等過敏反

7、應，淺表淋巴結、脾臟未觸及腫大。2例植骨術后骨不愈合，但經過再手術第2次植入BMG，術后體溫正常，皮膚無紅腫，傷口甲級愈合，最后骨折完全愈合。 2.BMG掃描電鏡觀測結果：橫斷面見清晰的哈佛氏管及骨陷窩結構，但未見血管內皮組織和骨細胞?？v切面見清晰整齊的膠原纖維束，束間未見橫向及交叉連接束。 3.細胞因子檢測結果：20例骨折愈合障礙病例TGF-β1、IFN-r、GM-CSF術前與術后1周或2周比較，差異均無顯著意義(P＞

8、0.05)，術后1周與術后2周比較，差異也無顯著性意義(P＞0.05)。 研究結論：本研究是國家自然科學基金資助課題中的部分內容，通過對BMG的電子顯微結構、臨床植入觀察，細胞因子(TGF-β、GM-CSF和IFN-r)血清學檢測，進一步從分子水平上探討B(tài)MG的免疫原性。掃描電鏡檢查顯示BMG哈佛氏管內已無血管內皮組織，陷窩內骨細胞已溶解吸收消失；20例BMG治療骨折愈合障礙臨床觀察中，均表現(xiàn)為免疫耐受，最終骨折為完全愈合；三種