2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、葡萄扇葉病毒(GFLV)引起的葡萄扇葉病是全世界范圍內(nèi)最嚴(yán)重的葡萄病毒病害之一。GFLV可導(dǎo)致葡萄產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降,并且縮短葡萄園的使用壽命。我國對葡萄扇葉病的研究較晚,1980年首次在新疆發(fā)現(xiàn),至今未獲得中國GFLV分離物的全基因組序列。為了建立穩(wěn)定、可靠、快速、靈敏的GFLV分子生物學(xué)檢測方法,并調(diào)查GFLV在我國的發(fā)生分布情況以及分子變異特點(diǎn),本研究針對GFLV開展了巢式RT-PCR、實(shí)時熒光定量RT-PCR分子檢測技術(shù)研究,對

2、來自全國19個省、市、自治區(qū)的376株葡萄樣品進(jìn)行GFLV檢測,以克隆測序得到的部分移動蛋白(MP)和外殼蛋白(CP)基因序列進(jìn)行變異分析,并展開GFLV全基因組序列擴(kuò)增,主要取得了以下研究結(jié)果:
  根據(jù)GFLV的MP和CP基因分別設(shè)計引物,研究建立了GFLV的巣式RT-PCR,該方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,與常規(guī)RT-PCR相比,具有較高的靈敏度,其中巣式引物FL-MPn1檢測效果較好。另外,通過引物選擇、條件優(yōu)化和擴(kuò)增效率比較,建

3、立了以FL-HP1為引物的實(shí)時熒光定量RT-PCR方法,該方法檢測靈敏度是巢式RT-PCR的10倍。利用建立的熒光定量方法測定葡萄樣品中GFLV含量,并檢測58個葡萄樣品,結(jié)果表明不同葡萄樣品中GFLV含量差異較大,與ELISA和巢式PCR相比,能檢測出更多的GFLV分離物。
  對來自全國19個省、市、自治區(qū)的葡萄樣品用ELISA及巢式RT-PCR進(jìn)行檢測,巢式RT-PCR檢測376個樣品,而ELISA檢測其中279個樣品。結(jié)果

4、兩套巢式PCR引物共檢出陽性樣品43個,檢出率11.4%;而ELISA檢出陽性樣品61個,檢出率21.9%;ELISA與巢式RT-PCR總共檢出陽性樣品72個,檢出率為19.2%。19個地區(qū)中有9地區(qū)檢出陽性樣品,檢出率分別在6.1%-54.2%??偣矙z測102個葡萄品種,28個品種檢出GFLV,品種帶毒率為27.5%,其中檢出帶毒率較高的有:品麗珠、蛇龍珠、貴人香、紅地球、巨玫瑰、赤霞珠。
  本研究通過陽性PCR產(chǎn)物的克隆、測

5、序獲得了39條2BMP基因序列和22條2CCP基因序列,序列分析結(jié)果顯示本研究獲得的MP和CP基因間核苷酸序列相似性均較高(94.9-100%),而與其他GFLV分離物的序列比對結(jié)果顯示:2BMP核苷酸和氨基酸序列相似性分別為78.3-86.6%和89.3-96.4%,2CCP核苷酸和氨基酸序列相似性分別為74.8-83.3%和81.4-91.4%。進(jìn)化分析結(jié)果顯示,本研究獲得的分離物聚集成一個獨(dú)立的亞組,表明分離物間起源相同,且進(jìn)化過

6、程中未受到其他地理起源的GFLV變種的影響。
  擴(kuò)增得到中國GFLV分離物GFLV-SDHN的RNA1和RNA2進(jìn)行全基因組序列擴(kuò)增,其RNA1、RNA2全長核苷酸序列分別為7367 nt、3788 nt(不包括PolyA)。其中GFLV-SDHN的RNA1序列在迄今為止已報道的所有GFLV分離物中是最長的,其5’-UTR為266 nt,比其他GFLV分離物長22–24nt。GFLV-SDHN與其他GFLV分離物的序列及進(jìn)化樹分

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