SARS冠狀病毒的臨床檢測和基因變異分析研究.pdf

1、中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院博士學(xué)位論文SARS冠狀病毒的臨床檢測和基因變異分析研究姓名：徐東平申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)傳染病學(xué)指導(dǎo)教師：張玲霞20060524軍醫(yī)進修學(xué)院博士學(xué)位論文sA憋冠狀病毒的臨床檢測和基因變異分析研究中文摘要本研究旨在研究嚴重急性呼吸綜合誣(sAJ遲)患者臨床標(biāo)本中sARs冠狀病毒(sAI峪cov)RNA和特異性抗體的檢出特點、sARsCov的體外培養(yǎng)分離特點和病毒棘突蛋白編碼基因(s基因)和核表殼蛋白編碼

2、基因(N基因)的序列變異特點，以期為sARs的早期診斷，合理預(yù)防，以及對深入了解sARscoV的病毒學(xué)特點和s√～I塔的發(fā)病機制研究提供幫助。l，sARs患者臨床標(biāo)本中SARscoVRNA及特異性抗體的檢測檢測了54例sARs患者486份臨床標(biāo)本(血漿，全血痰，尿，糞便)中的sARscoVRNA，根據(jù)丑lJOl株sARscoV序列(GenB觚k序列號：AY278488)設(shè)計了N基因片段擴增引物，結(jié)合世界衛(wèi)生組織(wH0)推薦的R基因片段

3、擴增引物，顯著提高了用巢式反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(nc刪RTPcR)對sARS七ovRNA的檢出率，在519％(28／54)的患者中檢測到病毒RNA同時對病毒鼢m和抗s舢峪cov特異性抗體的動態(tài)檢測表明，sARs發(fā)病前2周S舢娼covRNA陽性率高于抗體陽性率，對sARs早期確診有一定意義2、sARs患者糞便，尿液中sA姻《ov的培養(yǎng)鑒定用Ⅵ∞E6細胞對12例患者的2l份糞便和尿液標(biāo)本進行了培養(yǎng)分離，用盲傳法在16份s燦峪covRNA陽性標(biāo)

4、本中，有10份標(biāo)本培養(yǎng)分離到了活病毒，其中l(wèi)份尿液和2份糞便分別采自3例發(fā)病時間28d(2弘36d)的恢復(fù)期患者，提示sARs恢復(fù)期患者排泄物仍可能具有傳染性3、最早傳入北京地區(qū)的SA髓covs基因全序列克隆用從北京地區(qū)首批發(fā)現(xiàn)的l例sARs患者咽拭子接種細胞培養(yǎng)上清的RNA為模板，通過巢式RTPcR分6個片段擴增出了sARsC0vs基因全序列。用分步重疊PcR連接克隆了s基因全片段，序列分析表明克隆基因與BJ01株SARscovs基因