葡萄卷葉病毒-3檢測技術與脫除方法研究.pdf

1、葡萄卷葉病(Grapevine leafroll disease)是葡萄上一種重要的病毒病，現(xiàn)已研究表明引起該病的病原不止一種，目前國際上承認的已有11種，其中葡萄卷葉伴隨病毒-3(GLRaV-3)是最主要的一種。進行病毒脫毒處理、推廣無毒化栽培對我國葡萄產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。本研究以優(yōu)良的釀酒葡萄品種蛇龍珠病株為材料，對GLRaV-3檢測技術和脫除方法進行了研究。主要研究結果如下：
　　 1.通過對GLRaV-3DAS-

2、ELISA和RT-PCR檢測方法的優(yōu)化，建立了GLRaV-3檢測技術體系。
　　 2.對比研究了GLRaV-3 DAS-ELISA和RT-PCR兩種檢測方法的檢測效果。研究結果表明，針對同一感病材料，利用RT-PCR在試驗所設的第一次檢測時間(6月份)就能檢測到該病毒，而DAS-ELISA直到試驗所設的第二次檢測時間(7月份)才能檢測到該病毒，確定RT-PCR法檢測的靈敏度高于DAS-ELISA。
　　 3.利用半定量R

3、T-PCR法對比研究了不同部位、不同檢測時間對GLRaV-3檢測結果靈敏度的影響。研究結果表明，不同部位之間檢測靈敏度大小排序為：韌皮部>葉柄>葉片；不同檢測時間靈敏度大小排序為：9月>8月>7月>6月。
　　 4.通過對葡萄組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)條件的優(yōu)化，確定透光、透氣性好的封口膜更適于葡萄組織培養(yǎng)容器的封口。在同等培養(yǎng)條件下，健康試管苗的生長勢明顯優(yōu)于帶毒試管苗，帶GLRaV-3的植株生根遲，生長緩慢。
　　 5.對比

4、研究了莖尖培養(yǎng)與熱處理結合莖尖培養(yǎng)兩種脫毒方法對GLRaV-3的脫除效果。研究結果表明，當莖尖大小為0.2-0.5 mm時，莖尖成活率為40%，莖尖培養(yǎng)脫毒率為30%，有效脫毒率為12%，熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫毒率為90%，有效脫毒率為36%，莖尖大小為0.8-1.0mm時，莖尖成活率為93.3%，莖尖培養(yǎng)脫毒率為10%，有效脫毒率為9.3%，熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫毒率為60%，有效脫毒率為56%。熱處理結合莖尖培養(yǎng)的脫毒效果明顯高于莖尖培