內(nèi)毒素對(duì)肝星狀細(xì)胞醛固酮的分泌、CYP11B2及NF-κB P65 mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞，探討不同濃度內(nèi)毒素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞醛固酮的分泌、醛固酮合成酶基因CYP11B2 mRNA及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子NF—κB P65 mRNA表達(dá)的影響，在作用最明顯的濃度下，研究?jī)?nèi)毒素不同作用時(shí)間，肝星狀細(xì)胞醛固酮的分泌、醛固酮合成酶基因CYP11B2 mRNA及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子NF—κB P65 mRNA的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究?jī)?nèi)毒素在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中的作用提供理論依據(jù)。 方法:傳代培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC

2、—T6，不同濃度的內(nèi)毒素處理細(xì)胞后分為4個(gè)濃度系列組，依次為0.01、0.1、1.0和10.0μg/ml組，同時(shí)設(shè)立無(wú)內(nèi)毒素處理的對(duì)照組，并用濃度為1.0μg/ml的內(nèi)毒素處理細(xì)胞，分為4個(gè)時(shí)間系列組，依次為6h、12h、24h和48h組，各時(shí)間點(diǎn)均設(shè)立了無(wú)內(nèi)毒素處理的對(duì)照組。應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)內(nèi)毒素處理后的肝星狀細(xì)胞分泌醛固酮的情況，半定量RT—PCR方法檢測(cè)內(nèi)毒素處理后肝星狀細(xì)胞CYP11B2及NF—κB P65 mRNA的表達(dá)水平

3、。 結(jié)果:體外成功培養(yǎng)了肝星狀細(xì)胞，內(nèi)毒素作用濃度為0.01、0.1、1.0和10.0μg/ml組HSC醛固酮的分泌、醛固酮合成酶基因CYP11B2mRNA及NF—κB P65 mRNA的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，以內(nèi)毒素濃度1.0μg/ml時(shí)作用效果最明顯，而內(nèi)毒素濃度10.0μg/ml組HSC醛固酮的分泌、CYP11B2及NF—κB P65mRNA的表達(dá)較1.0μg/ml組有明顯降低(P＜0.05)，內(nèi)毒素濃度為

4、1.0μg/ml的時(shí)間系列組中6h、12h、24h和48h組HSC醛固酮的分泌、CYP11B2及NF—κB P65mRNA的表達(dá)顯著高于0h組(P＜0.05)。HSC中醛固酮的分泌與CYP11B2 mRNA的表達(dá)間呈正相關(guān)(r=0.892，P＜0.01)，醛固酮的分泌與NF—κB P65 mRNA的表達(dá)間也呈正相關(guān)(r=0.889，P＜0.01)。 結(jié)論:一定濃度的內(nèi)毒素可以上調(diào)大鼠肝星狀細(xì)胞醛固酮的分泌和醛固酮合成酶基因CYP