歐洲七葉樹體細胞胚發(fā)生和植株再生研究.pdf

1、歐洲七葉樹是重要的園林綠化樹種,并具有重要的醫(yī)藥價值,國內(nèi)引種栽培有限,種苗供不應求,通過細胞工程技術快速繁殖性狀優(yōu)良的再生植株,具有重要的應用價值和理論意義.該文就歐洲七葉樹的組織培養(yǎng)和體細胞胚發(fā)生以及植株再生進行了系統(tǒng)研究,主要結果如下:以植物細胞具有全能性的理論為依據(jù),以歐洲七葉樹幼嫩葉片為外植體,進行體細胞胚胎發(fā)生研究,研究結果表明,誘導愈傷組織的適宜培養(yǎng)基是MS+2,4-D 2mg/L+KT0.2mg/L,MS+BA 8mg/

2、L+NAA 1mg/L有利于胚性愈傷組織的誘導和增殖,添加ZT 2mg/L或BA 5mg/L和IAA 0.2mg/L的MS培養(yǎng)基有利于體細胞胚發(fā)育和成熟,體細胞胚可直接誘導次生胚發(fā)生,MS+KT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L或MS+ZT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L培養(yǎng)基誘導效果最好,增殖頻率分別為214％、256％.以歐洲七葉樹體細胞胚的子葉為外植體,誘導次生胚發(fā)生或分化不定芽.結果表明,MS+ZT 0.5

3、~2mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.2mg/L培養(yǎng)基可直接誘導體胚發(fā)生,誘導率超過80％;MS+BA 2mg/L+NAA 0.2 mg/L或MS+TDZ 0.01mg/L+NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基可直接分化不定芽,出芽誘導率分別為88％、100％.以歐洲七葉樹成熟種子的胚芽進行離體培養(yǎng)和快速繁殖,結果表明:高約2cm的無菌苗在MS+0.6mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA或MS+0.4~0.6mg/L ZT+0.

4、1 mg/L NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)15 d左右可誘導出不定芽,分化頻率為100％,平均每株產(chǎn)芽35.7個;MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+10mg/L AD培養(yǎng)基有利于芽伸長;生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.4 mg/L NAA+0.2mg/LIBA時,生根率可達75％.通過組織細胞學方法研究體細胞胚的起源與發(fā)生部位,發(fā)現(xiàn)歐洲七葉樹體細胞胚為單細胞起源,外植體的表面及內(nèi)部都可以發(fā)生體細胞胚.胚性細胞多為橢圓形,細胞質(zhì)濃