牡丹體細胞胚間接再生途徑研究.pdf

1、本研究以牡丹品種‘洛陽紅’、‘烏龍捧盛’、‘鳳丹白’、‘珊瑚臺’、‘胡紅’等為材料,研究不同外植體類型及基本培養(yǎng)基類型、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)種類及濃度、不同光質(zhì)比例及光照度等因素對牡丹愈傷組織誘導及增殖的影響,以期篩選出適宜于牡丹愈傷組織誘導、增殖的培養(yǎng)基配方及適宜的LED光質(zhì)比例及光照度和適宜的CCFL光質(zhì)比例,建立較為高效穩(wěn)定的牡丹愈傷組織誘導體系。同時,以誘導出的愈傷組織為材料,研究不同基本培養(yǎng)基類型、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)種類及濃度、培養(yǎng)

2、方式對愈傷組織叢誘導生芽及體細胞胚的影響,以期篩選出愈傷組織誘導叢生芽及體細胞的培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)方式,建立牡丹體細胞胚間接再生途徑,為解決牡丹試管苗生根困難提供一定的理論基礎(chǔ)及技術(shù)參考。結(jié)果如下:
　　 1.通過研究不同激素及濃度對牡丹品種‘洛陽紅’愈傷組織誘導的影響,結(jié)果表明:5種不同的外植體類型中,葉柄各部分的整體愈傷組織誘導率均高于葉片及莖段組織；葉柄近莖端、中間端及近葉端中以近莖端的效果較好。單獨使用6-BA即可獲得愈傷

3、組織；綜合考慮愈傷組織誘導率及外植體褐變率情況,6-BA和2.4-D處理組合的愈傷組織誘導效應優(yōu)于6-BA和NAA處理組合。在6-BA和2.4-D處理組合中,6-BA1.0 mg·L-1+2.4-D1.0 mg·L-1處理是牡丹品種‘洛陽紅’葉柄誘導愈傷組織的較好培養(yǎng)基。在牡丹愈傷組織增殖方面,NAA和6-BA處理組合優(yōu)于NAA和KT處理,以NAA1.0mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1處理效果較好。
　　 2.不同品種

4、對牡丹愈傷組織誘導率的影響存在差異。牡丹品種‘胡紅’的葉柄各部分及葉片的愈傷組織誘導率均高于‘烏龍捧盛’和‘洛陽紅’,‘洛陽紅’愈傷組織誘導效果最差。在不同外植體類型對牡丹愈傷組織誘導影響方面,‘烏龍捧盛’、‘洛陽紅’及‘胡紅’等三品種的葉柄愈傷組織誘導率均高于葉片,且葉柄的近莖端、中間端和近葉端的愈傷組織誘導率依次呈下降趨勢；其中以‘胡紅’的葉柄部位誘導率最高,達到62.2％。
　　 3.在LED不同光質(zhì)條件下,4種外植體類型

5、中以葉柄中間端誘導愈傷組織效果最好；7種光質(zhì)條件下以75％R+25％B處理的效果最好。黑暗處理及對照(PGF)處理下的牡丹愈傷組織誘導率均低于其他光質(zhì)處理。在增殖方面,‘鳳丹白’愈傷組織的增重及其增重倍率均在LED條件下以70％R+30％B處理最高,‘珊瑚臺’愈傷組織增重效果在CCFL條件下以60％R+40％B處理最佳。而在一定LED光照度范圍(30～80μmol·s-1·m-2)內(nèi),牡丹品種‘鳳丹白’愈傷組織增重及其增重倍率隨著光照度

6、的增強而整體呈先上升后下降的趨勢。其中光照度為60μmol·s-1·m-2條件下的‘鳳丹白’愈傷組織增重顯著高于其他處理；但光照度較高時不利于愈傷組織的增殖。
　　 4.兩種培養(yǎng)方式下,‘鳳丹白’愈傷組織的叢生芽誘導效果整體優(yōu)于‘烏龍捧盛’；固體培養(yǎng)條件下不同處理在以1/2 MS為基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導效果整體優(yōu)于MS培養(yǎng)基；綜合叢生芽誘導率和愈傷組織玻璃化率、褐變率等影響因素,‘烏龍捧盛’愈傷組織的叢生芽誘導以MS+Ca2++

7、NAA0.5 mg·L-1+6-BA1.5 mg·L-1處理為最佳,‘鳳丹白’愈傷組織的叢生芽誘導率以1/2MS+Ca2++NAA0.1 mg·L-16-BA0.5 mg·L-1處理效果最好。液體培養(yǎng)條件下,‘烏龍捧盛’愈傷組織的叢生芽誘導率以1/2MS+Ca2++NAA0.5 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1處理為較佳,而‘鳳丹白’愈傷組織的叢生芽誘導率以1/2MS+Ca2++NAA0.1 mg·L-1+6-BA0.3 mg

8、·L-1處理效果較好。同時發(fā)現(xiàn)愈傷組織的玻璃化率、褐變率與叢生芽誘導率之間具有一定的相關(guān)性。
　　 5.兩種培養(yǎng)方式下,‘鳳丹白’愈傷組織的體細胞胚誘導效果均優(yōu)于‘烏龍捧盛’；在固體培養(yǎng)方式下,適宜于‘烏龍捧盛’愈傷組織誘導體胚的培養(yǎng)基為WPM>1/2MS>MS,適宜激素種類為6-BA>TDZ>KT；適宜于‘鳳丹白’愈傷組織誘導體胚的培養(yǎng)基為1/2MS>WPM>MS,適宜激素種類為TDZ>6-BA>KT；綜合考慮體胚誘導率、愈傷

9、組織褐變率等因素,固體培養(yǎng)條件下‘烏龍捧盛’愈傷組織誘導體細胞胚的最佳培養(yǎng)基為‘WPM+6-BA1.5mg·L-1；‘鳳丹白’愈傷組織誘導體細胞胚的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+Ca2++TDZ0.5 mg-L-1。液體培養(yǎng)條件下,‘烏龍捧盛’愈傷組織的體胚誘導效果以1/2MS+Ca2++TDZ0.1 mg·L-1處理為最佳,‘鳳丹白’愈傷組織的體胚誘導效果以1/2MS+Ca2++6-BA1.5 mg·L-1處理下達到最高。同時發(fā)現(xiàn)愈傷組織褐