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文檔簡介
1、奶牛乳腺纖維化主要由奶牛乳腺炎引起,各種病因引起的奶牛乳腺炎均可導致奶牛乳腺不同程度的纖維化過程。纖維化的乳腺泌乳量降低,嚴重時發(fā)展為乳腺硬化導致奶牛淘汰。研究細胞因子在奶牛乳腺纖維化中的作用,對奶牛乳腺纖維化的防治具有重要意義。
目前關于奶牛乳腺纖維化發(fā)生機制的研究報道很少,在奶牛乳腺纖維化過程中,除間質成纖維細胞(BMFB)能夠產生細胞外基質(ECM)外,奶牛乳腺上皮細胞(BMEC)能否通過上皮-間質轉化(EMT)形成肌纖
2、維母細胞(MFB)并合成 ECM仍不明確,與纖維化相關的一些細胞因子與 BMEC的轉分化及BMFB產生ECM的相互關系需要深入研究。本研究分別用不同濃度的TNF-α(1、5、10ng/mL)、IFN-γ(5、10、20ng/ml)及TNF-α/IFN-γ聯合液(濃度比分別為1:1、1:2、1:5)作用于體外培養(yǎng)的BMEC和BMFB,于不同時刻(12h、24h、48h、72h)取細胞總RNA和總蛋白,分別用實時熒光定量RT-PCR和wes
3、tern-blot方法檢測平滑肌肌動蛋白(α-SMA),結締組織生長因子(CTGF)及膠原I(COLIα1) mRNA及α-SMA蛋白表達水平。同時,根據細胞因子放免檢測結果,用篩選出的含有五種細胞因子(TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、bFGF、PDGF)的奶牛乳汁分別作用體外培養(yǎng)BMEC和BMFB,于不同的時刻(12h、24h、48h、72h),用實時熒光定量RT-PCR的方法檢測含有五種細胞因子的奶牛乳汁對兩種細胞α-SMA、
4、CTGF和COLIα1 mRNA相對表達量的影響。
結果顯示:外源性TNF-α對BMEC和BMFBα-SMA、CTGF和COLIα1三種基因mRNA表達基本起促進作用,對BMFBα-SMA的蛋白表達也起促進作用,但未檢測到BMECα-SMA蛋白的表達;外源性IFN-γ對BMEC和BMFBα-SMA、CTGF和COLIα1三種基因mRNA及α-SMA蛋白表達均呈抑制作用。不同比例的TNF-α/IFN-γ聯合液均能明顯抑制BMEC
5、 CTGF、α-SMA、COLIα1 mRNA及α-SMA蛋白表達,且負時效、負量效關系明顯;對BMFB CTGF、α-SMA mRNA及α-SMA蛋白表達也起明顯抑制作用,但對COLIα1 mRNA表達起促進作用。TNF-α和TGF-β高含量的乳汁作用BMEC和BMFB在各時刻(12h、24h、48h、72h)α-SMA、CTGF和COLIα1 mRNA表達量均比低含量的乳汁作用高;IFN-γ高含量的乳汁對BMEC CTGF和COLI
6、α1 mRNA表達量的抑制作用較低含量的乳汁強,而對α-SMA mRNA表達量作用相反;對BMFB CTGF和COLIα1 mRNA表達量的抑制作用,12h、24h含量高的乳汁較含量低的乳汁作用強,但48h、72h卻相反,而對BMFBα-SMA的mRNA表達量的抑制作用,IFN-γ高含量的乳汁比低含量的乳汁強。bFGF高含量的乳汁作用BMEC和BMFB,CTGF和COLIα1mRNA表達量均比bFGF低含量的乳汁作用高,但對α-SMA
7、mRNA表達的抑制作用卻相反。PDGF-BB高含量的乳汁作用BMEC,CTGF和COLIα1 mRNA表達量均比低含量的乳汁作用高,但對α-SMA mRNA表達的抑制作用卻相反;PDGF-BB高含量的乳汁作用BMFB,α-SMA mRNA表達量均比低含量的乳汁作用高,而對CTGF和COLIα1 mRNA表達的影響卻相反。
研究結果表明,兩種外源性細胞因子及含有細胞因子的乳汁對奶牛乳腺上皮細胞和成纖維細胞中纖維化指標的表達均產生
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