根癌農桿菌介導的Bt和PTA基因轉化紫花苜蓿“中苜一號”的初步研究.pdf

1、紫花苜蓿是栽培利用最廣泛的豆科牧草，全球種植面積約3500萬hm2。苜蓿的大面積種植，也為苜蓿蟲害的發(fā)生和流行創(chuàng)造了有利的生態(tài)條件，近兩年來蟲害問題日益突出，己成為制約苜蓿產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的主要因素之一。隨著生物技術的發(fā)展和廣泛應用，利用轉基因技術改良苜蓿的性狀已成為可行的手段。 實驗選取由本研究室通過常規(guī)大田育種技術育成的紫花苜蓿品種“中苜一號”作為基因轉化受體，首先，以該品種為對象，選用下胚軸和子葉為外植體，進行組織培養(yǎng)系統(tǒng)學研究

2、，尋找具有相對較高分化率的外植體和適用于該品種的基本培養(yǎng)基等條件；其次，對“中苜一號”進行了抗生素(ppt)的敏感性實驗，并具體探討了轉化過程中，菌液濃度(OD600)，侵染時間，共培養(yǎng)時間等影響轉化效率的環(huán)節(jié)。摸索出轉化最佳條件為：以“中苜一號”子葉作為外植體，UM為基本培養(yǎng)基，以OD600為0.6的菌液侵染10分鐘，轉到加蓋有一層滅菌濾紙的培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3天后轉到篩選培養(yǎng)基上篩選，篩選培養(yǎng)基附加ppt8mg/l及Carb400mg/