根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的MAPKK基因轉(zhuǎn)化大巖桐的研究.pdf

1、促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)是生物體內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)鍵組分之一,已發(fā)現(xiàn)它組成的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)途徑在植物中起著多方面的作用.用基因工程技術(shù)定向改良花卉品質(zhì),是當(dāng)今花卉育種的重要內(nèi)容.該研究用野生型、突變型MAPKK基因轉(zhuǎn)化觀賞花卉大巖桐,為進(jìn)一步研究MAPKK基因的功能奠定基礎(chǔ),也為花卉植物的轉(zhuǎn)基因提供實(shí)驗(yàn)系統(tǒng).該研究構(gòu)建了野生型、突變型MAPKK基因植物表達(dá)載體,并用凍溶法將其導(dǎo)入了根癌農(nóng)桿菌LBA4404.載體構(gòu)建的過(guò)程包括

2、目的基因的PCR擴(kuò)增、目的基因連接到pMD 18-T載體、目的基因連接到中間表達(dá)載體pIB1、目的基因及啟動(dòng)子、終止子連接到表達(dá)載體pBin19.最后得到的植物表達(dá)載體pBM含目的基因及植物選擇標(biāo)記基因NPTⅡ.以葉盤為外植體,初步建立了大巖桐的遺傳轉(zhuǎn)化體系.研究發(fā)現(xiàn),卡那霉素(Kan)對(duì)大巖桐不定芽和不定根的誘導(dǎo)有較強(qiáng)的抑制作用,其選擇濃度分別為50mg/L和10mg/L.頭孢霉素(Ce)對(duì)大巖桐不定芽的誘導(dǎo)也有抑制作用,但較卡那霉素