根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)FPF1基因轉(zhuǎn)化菊花的研究.pdf

1、該研究旨在通過對菊花再生體系及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究,將FPF1基因?qū)氲骄栈ㄖ?以期獲得花期提前的菊花新材料,并為利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良菊花品種的廣泛運(yùn)用打下基礎(chǔ).主要工作和結(jié)果如下:1.高頻再生體系的研究通過對5個(gè)菊花品種幼葉再生的研究,獲得了"黃秀芳"以幼葉為外植體的高頻再生體系,在以MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA的分化培養(yǎng)基中再生率可高達(dá)94％.在1/2MS培養(yǎng)基中添加0.05mg/L NAA可使再生芽出

2、根快、整齊、根粗壯.2.建立了以"黃秀芳"幼葉為受體的轉(zhuǎn)化體系通過對外植體的Cef脫菌濃度、KM篩選濃度以及影響轉(zhuǎn)化頻率因素的研究,獲得了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的"黃秀芳"幼葉轉(zhuǎn)化體系:葉盤在OD<,600>=0.5的根癌農(nóng)桿菌菌液中浸染30min、45min共培養(yǎng)2~4d、延遲篩選3d;以100mg/L Cef為脫菌濃度,15mg/L KM為葉盤分化抗性篩選濃度,10mg/LKM為生根抗性篩選濃度.3.根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)FPF1基因轉(zhuǎn)化菊花及轉(zhuǎn)基

3、因植株的田間鑒定獲得了一批FPF1基因的轉(zhuǎn)基因植株,平均轉(zhuǎn)化率為2.75％.通過轉(zhuǎn)基因植株園藝性狀的田間觀察,與對照相比,部分植株開花期明顯提前,且其它園藝性狀也發(fā)生了很大改變.主要表現(xiàn)在:植株變矮、葉片變小、葉色加深、分枝節(jié)位降低等,初步證明外源FPF1基因已在轉(zhuǎn)基因植株中進(jìn)行了表達(dá).4.轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測對轉(zhuǎn)基因植株的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到了與陽性對照FPF1(330bp)目的基因相同的特異性片段,從分子水平上證明目的基因已