結(jié)球甘藍(lán)和青花菜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)化.pdf

1、結(jié)球甘藍(lán)(Brassica oleracea var.capitata、）和青花菜（Brassica oleracea var.italica）均屬于十字花科(Cruciferae)蕓薹屬(Brassica)二年生草本植物。二者均具有相當(dāng)廣泛的自交不親和性，在雜交種親本系的常規(guī)選育中要多年蕾期自交。用常規(guī)方法進(jìn)行田間育種，一般需要6～8代才能選育出理想的材料。通過(guò)游離小孢子培養(yǎng)得到的植株經(jīng)染色體加倍后，能獲得遺傳上完全純合的后代。這不僅

2、可大大縮短雜交育種工作中自交系選育進(jìn)程，而且對(duì)新品種的選育和種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)起到非常大的作用。
　　 目前國(guó)內(nèi)外有很多關(guān)于游離小孢子培養(yǎng)的報(bào)道，技術(shù)也越來(lái)越成熟，但小孢子基因型間產(chǎn)胚率差異大及植株再生率低已成為實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中的一大難題;另外，在進(jìn)行倍性鑒定時(shí)，缺乏一種簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用而又可靠的倍性鑒定方法。
　　 因此，本論文通過(guò)對(duì)選取的17份不同類(lèi)型結(jié)球甘藍(lán)和10份不同類(lèi)型青花菜雜種一代為試材，對(duì)影響小孢子產(chǎn)胚率和植株再生

3、率的因素、小孢子再生植株染色體倍性的鑒定、小孢子再生植株群體的自然加倍率和單倍體植株的人工加倍方法進(jìn)行了研究。得出以下結(jié)果:
　　 1.在影響甘藍(lán)和青花菜游離小孢子胚胎誘導(dǎo)率的因素方面:
　　 (1)不同基因型材料最適花蕾長(zhǎng)度有一定差異，結(jié)球甘藍(lán)和青花菜分別在3.5～4.5mm和3.0～3.5mm時(shí)，小孢子大多處于單核靠邊期，獲得的胚狀體最多;
　　 (2)不同基因型之間小孢子產(chǎn)胚率有很大差異;
　　 (

4、3)獲得高效小孢子胚狀體的溫度及培養(yǎng)基pH值最佳組合分別為:
　　 結(jié)球甘藍(lán):33℃熱激2d+培養(yǎng)基pH6.2;
　　 青花菜:4℃低溫1d+33℃熱激1d+培養(yǎng)基pH6.2。
　　 (4)在提取液中加入8％甘露醇有助于結(jié)球甘藍(lán)和青花菜小孢子胚胎發(fā)生;
　　 (5)前期用17％的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2d后更換為新的13％蔗糖培養(yǎng)基對(duì)小孢子產(chǎn)胚率也有促進(jìn)作用;
　　 (6)激素含量對(duì)小孢子胚狀體的誘導(dǎo)的作

5、用差異很大。NLN-13+0.05mg·L-16-BA+0.1g·L-1NAA有助于結(jié)球甘藍(lán)小孢子胚胎誘導(dǎo);而1/2NLN-13培養(yǎng)基對(duì)青花菜小孢子胚胎發(fā)生率有促進(jìn)作用。
　　 (7)預(yù)處理是小孢子培養(yǎng)成功的前提條件。試驗(yàn)表明，低溫處理2d、8％甘露醇、適宜濃度的CH和秋水仙素都能提高結(jié)球甘藍(lán)小孢子的胚胎誘導(dǎo)率。
　　 2.在影響游離小孢子胚狀體再生成植株的因素方面:
　　 (1)7.0g·L-1瓊脂濃度的B5固

6、體培養(yǎng)基最適合小孢子胚狀體的萌發(fā)和植株再生，且子葉胚再生植株的頻率高于非子葉胚;
　　 (2)在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d的子葉胚轉(zhuǎn)到再生培養(yǎng)基后成苗率較高;
　　 (3)培養(yǎng)基中加入4.0～5.0mg·L-1的AgNO3能有效解決胚狀體再生植株褐化、玻璃化等現(xiàn)象;
　　 3.通過(guò)對(duì)結(jié)球甘藍(lán)和青花菜小孢子再生植株的染色體倍性與氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)之間的相關(guān)性進(jìn)行研究，得出孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)少于或等于10個(gè)的為單倍體，