盅口屬和冠環(huán)屬線蟲(chóng)的分類及親緣關(guān)系分析.pdf

1、感染馬屬動(dòng)物的寄生線蟲(chóng)不僅數(shù)量巨大，而且種類繁多。尤其是圓線亞科(Strongylinae)與盅口亞科(Cyathostominae)圓線蟲(chóng)嚴(yán)重危害馬屬動(dòng)物的健康，給畜牧業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)困擾和損失。雖然驅(qū)蟲(chóng)藥能夠防治圓線蟲(chóng)病，但這種手段已經(jīng)導(dǎo)致盅口亞科線蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性，使患病率增加，改變了宿主體內(nèi)的寄生蟲(chóng)種群結(jié)構(gòu)。所以，提出新型的綜合性控制方法顯得尤為重要。然而，關(guān)于馬屬動(dòng)物寄生線蟲(chóng)的基礎(chǔ)生物學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)方面的知識(shí)十分有限，主要是因?yàn)橐罁?jù)

2、形態(tài)學(xué)鑒定種類和診斷有一定的局限性。本研究采用經(jīng)典分類與分子分類相結(jié)合的方法對(duì)盅口亞科盅口屬（Cyathostomum）和冠環(huán)屬（Coronocyclus）線蟲(chóng)的分類和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行分析，首次描述了3種冠環(huán)屬線蟲(chóng)的掃描電鏡結(jié)構(gòu)，然后測(cè)定和分析兩個(gè)屬的ITS序列和部分cox1(pcox1)序列，并探討和分析了他們的親緣關(guān)系和分類地位。
　　通過(guò)對(duì)采自河南省驢腸道的3種冠環(huán)屬線蟲(chóng):冠狀冠環(huán)線蟲(chóng)（Coronocycluscoronat

3、us）、大唇片冠環(huán)線蟲(chóng)（C.labiatus）、小唇片冠環(huán)線蟲(chóng)（C.labratus）進(jìn)行掃描電鏡的觀察，結(jié)果表明3種冠環(huán)線蟲(chóng)的體表形態(tài)特征差異明顯，主要表現(xiàn)在外葉冠數(shù)目、亞中乳突起始部位、雄蟲(chóng)生殖錐背唇上附屬物、雌蟲(chóng)尾部等方面。研究結(jié)果與之前學(xué)者們?cè)诠忡R下觀察的結(jié)果基本一致，相比之下，掃描電鏡觀察到的外部形態(tài)更清楚、更準(zhǔn)確，提供了更多更具體的結(jié)構(gòu)特征。本研究將冠環(huán)屬線蟲(chóng)與盅口屬的掃描電鏡結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了比較，為兩個(gè)屬的分類提供更詳細(xì)的形

4、態(tài)學(xué)資料。
　　運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)對(duì)3種盅口屬線蟲(chóng):四刺盅口線蟲(chóng)（Cyathostomumtetracanthum）、蝶狀盅口線蟲(chóng)（C.pateratum）、碗形盅口線蟲(chóng)（C.catinatum）和3種冠環(huán)屬線蟲(chóng)的rDNA-ITS序列進(jìn)行測(cè)定和比對(duì)分析。結(jié)果顯示:ITS（包括5.8S）序列長(zhǎng)748-843bp，其中冠狀冠環(huán)線蟲(chóng)的ITS2序列比其它種缺失約90bp，6個(gè)種的5.8S序列完全一致。ITS1+ITS2總變異

5、位點(diǎn)154個(gè)（包括gap），簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)64個(gè)。ITS1和ITS2的G+C含量分別為47.0％-48.6％和37.7％-41.1％。ITS2序列的差異性（0-31.9％）大于ITS1序列(0-4.9％)，ITS1和ITS2序列種間差異(1.1％-4.9％，1.2％-31.9％)明顯大于種內(nèi)差異(0-1.9％，0-0.9％)。而且，四刺盅口線蟲(chóng)與蝶狀盅口線蟲(chóng)和碗形盅口線蟲(chóng)的差異性，大于四刺盅口線蟲(chóng)與3種冠環(huán)線蟲(chóng)之間的差異性。研究獲得的盅口

6、屬和冠環(huán)屬線蟲(chóng)的部分cox1序列均為393bp，無(wú)插入和缺失，A+T含量(65.9％-68.9％)明顯高于G+C含量（31.1％-34.1％），顯示出AT堿基偏倚性。通過(guò)比對(duì)pcox1序列發(fā)現(xiàn)，種間差異（6.6％-15.8％）大于種內(nèi)差異(0.5％-2.5％)。以長(zhǎng)傘杯冠線蟲(chóng)（Cylicostephanus longiburs）為外群，基于ITS1+ITS2序列和pcox1序列分別構(gòu)建NJ和MP發(fā)育樹(shù)，得到的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本相似。內(nèi)群分為兩