冠環(huán)屬線蟲(chóng)rDNA-ITS序列分析及系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、寄生線蟲(chóng)的種類繁多，具有消化道，以宿主的消化物、腸組織、體液或血液為生，易導(dǎo)致宿主出現(xiàn)貧血等臨床癥狀，使宿主的健康受到損害；有些種類分泌的物質(zhì)對(duì)宿主的各個(gè)器官功能造成危害；其生活史復(fù)雜，病程長(zhǎng)，會(huì)削弱人或動(dòng)物的免疫力，影響宿主的生長(zhǎng)發(fā)育甚至生殖機(jī)能；有時(shí)一種家畜體內(nèi)可寄生幾種線蟲(chóng)，給治療帶來(lái)困難。因此，針對(duì)不同寄生線蟲(chóng)種類的調(diào)查研究十分重要，為各類線蟲(chóng)病的診斷鑒別及預(yù)防控制奠定理論基礎(chǔ)，確保畜牧業(yè)和人類的生產(chǎn)生活健康發(fā)展。在國(guó)外，關(guān)于寄

2、生線蟲(chóng)的分類、生活史、流行病學(xué)研究、現(xiàn)代分子分類鑒定及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)等方面的研究已多有報(bào)道。國(guó)內(nèi)對(duì)于各類寄生線蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)分類和分子分類鑒定分析也有不少，但對(duì)于圓線蟲(chóng)的分子分類鑒定方面仍很欠缺。本論文首次對(duì)河南省驢體內(nèi)寄生3種冠環(huán)屬圓線蟲(chóng)的分子鑒定分析和系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行詳細(xì)地研究。
　　本實(shí)驗(yàn)以我國(guó)河南省驢體內(nèi)寄生的3種冠環(huán)屬線蟲(chóng)(冠狀冠環(huán)線蟲(chóng)、大唇片冠環(huán)線蟲(chóng)、小唇片冠環(huán)線蟲(chóng))的5個(gè)樣品為研究對(duì)象，運(yùn)用保守引物NC5和NC2擴(kuò)增單條蟲(chóng)體rD

3、NA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)及5.8S序列，將擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化、測(cè)序及序列分析。測(cè)序結(jié)果顯示，ITS及5.8S序列總長(zhǎng)為748.843bp，變異位點(diǎn)(包含缺失)共有119個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)18個(gè)；其中ITS-1全長(zhǎng)為367-370bp，變異位點(diǎn)14個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)9個(gè)；ITS-2長(zhǎng)度為228-320 bp(其中冠狀冠環(huán)線蟲(chóng)有92bp的長(zhǎng)片段缺失)，變異位點(diǎn)105個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)9個(gè)；5.8S全長(zhǎng)均為153bp，且序列完全一致。序列組成分析

4、表明，ITS-1序列的G+C含量(48.00-48.50％)明顯高于ITS-2序列(37.70-40.30％)；冠環(huán)屬5條序列ITS序列多態(tài)性位點(diǎn)共出現(xiàn)5處，2處分別在ITS-1比對(duì)總長(zhǎng)的106位和168位，3處分別在ITS-2比對(duì)總長(zhǎng)的172位、220位和310位。
　　經(jīng)過(guò)序列兩兩比對(duì)分析得知，3種冠環(huán)屬圓線蟲(chóng)ITS-1的種間差異性為1.89-2.71％，ITS-2的種間差異性為5.66-31.88％。同時(shí)，將測(cè)得的5條序列提

5、交到Genbank，并獲得了序列登錄號(hào)(JN786948-JN786951)。將本研究獲得的序列與Genbank相應(yīng)種的序列兩兩比對(duì)分析，得到3種冠環(huán)線蟲(chóng)ITS序列的差異性范圍為0-0.83％。ITS序列的種間變異程度大于種內(nèi)變異程度，且差異顯著，說(shuō)明ITS序列可以作為鑒定冠環(huán)屬線蟲(chóng)的可靠的分子遺傳標(biāo)記。以微小杯冠線蟲(chóng)為外群，用本研究獲得的5條序列與從Genbank獲得的3條序列為數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，用鄰接法和最大簡(jiǎn)約法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果顯示，