二價抗蟲基因cry1C--cry24-對寒區(qū)超級稻松粳9號的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、松粳9號屬于寒區(qū)超級稻品種,在黑龍江第一積溫區(qū)廣泛種植,受二化螟危害嚴(yán)重。本研究通過摸索松粳9號的組織培養(yǎng)體系、優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系,利用混合農(nóng)桿菌侵染松粳9號愈傷組織將抗蟲基因cry1C*和cry2A*轉(zhuǎn)入松粳9號基因組,通過對轉(zhuǎn)基因T0代植株進行Basra抗性篩選、PCR檢測、Southern blot和室內(nèi)抗蟲性鑒定,對轉(zhuǎn)基因T1代植株進行RT-PCR檢測、Bt蛋白定量檢測及農(nóng)藝性狀考查等步驟,獲得了外源基因低拷貝整合、Bt

2、表達(dá)水平較高、農(nóng)藝性狀未發(fā)生明顯改變的轉(zhuǎn)基因水稻株系。研究的主要結(jié)果包括:
　　 (1)確定了以N685培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,附加2mg／L2,4-D、0.2mg／L6-BA,適合超級粳稻松粳9號愈傷組織誘導(dǎo)及生長的培養(yǎng)基；
　　 (2)建立了高效的具有秈稻血緣的寒區(qū)超級粳稻遺傳轉(zhuǎn)化體系,用分別含cry1C*和cry2A*表達(dá)載體的農(nóng)桿菌混合菌液,對超級粳稻松粳9號進行遺傳轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化效率及分化效率分別為12.74％和46.

3、71‰
　　 (3)在轉(zhuǎn)基因水稻T0代,初步建立了以TT51及受體品種為參照的水稻抗蟲性強弱評價體系；獲得了抗蟲性較好、外源基因低拷貝整合的轉(zhuǎn)cry1C*、轉(zhuǎn)cry2A*和cry1C*與cry2A*共轉(zhuǎn)化植株；
　　 (4)在轉(zhuǎn)基因水稻T1代,轉(zhuǎn)crylC*株系T1C-3和轉(zhuǎn)cry2A*株系T2A-2分別表達(dá)最高量的cry1C*和cry2A*,cry1C*與cry2A*哄轉(zhuǎn)化株系T1C+2A表達(dá)較高量的cry1C*和cr