兩個楊樹無性系再生體系的建立及抗蟲基因Cry1C+9C轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、楊樹作為三大速生樹種之一,在湖北省林業(yè)產(chǎn)業(yè)中具有重要的地位。楊樹無性系LH05-143、SN04-31和LN05-51作為F1代雜交無性系,在湖北省石首市楊樹研究所試驗林中生長表現(xiàn)良好,具有一定超親優(yōu)勢,并已經(jīng)進入品種鑒定階段。
　　 本論文以楊樹無性系LH05-143和SN04-31葉柄為外植體,建立了2個無性系的再生體系,并以楊樹無性系LN05-51為受體材料,開展了農(nóng)桿菌介導下的抗蟲基因Cry1C+9C轉(zhuǎn)化初步研究,獲得了

2、主要研究結(jié)果如下:
　　 1.以無性系LH05-143為研究對象,得出再生體系的最佳外植體為葉柄。葉柄的最佳消毒方法為:75％酒精消毒30s后滅菌水清洗2-3次,再用0.1％HgCl2消毒5min,LH05-143的污染率為10％,褐化率為5％。
　　 2.在誘導愈傷組織的研究中,葉柄的放置方式對愈傷誘導率影響不顯著,但誘導愈傷數(shù)存在顯著差異,并最終確定楊樹無性系再生材料葉柄的放置方式以橫放最佳。
　　 3.間接

3、再生誘導中,LH05-143和SN04-31的最佳愈傷誘導培養(yǎng)基配方均為MS+6-BA0.2mg/L+NAA1.0mg/L,此時獲得的愈傷組織緊實,顏色淺綠；在獲得愈傷組織的分化試驗中,發(fā)現(xiàn)LH05-143的最佳分化培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L,而SN04-31則為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
　　 4.直接再生過程中,本文利用二次回歸正交試驗設(shè)計優(yōu)化了LH05-143不

4、定芽分化試驗中激素6-BA(x1)和NAA(x2)的濃度及配比,獲得了二次回歸方程y=2.5699+0.4101x1-0.2694x2+0.0093x1x2-0.9183(x)-0.2537(x)并通過方程得到了關(guān)于LH05-143不定芽分化的最佳激素濃度為6-BA1.75mg/L、NAA0.30mg/L；對SN04-31的不定芽誘導采用了雙因素試驗,得到其最佳分化培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。

5、　　 5.所得不定芽的繼代增殖試驗中,LH05-143的最佳培養(yǎng)基配方為MS+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L,SN04-31的最佳培養(yǎng)基配方為MS+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L。
　　 6.LH05-143的最佳生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+IBA0.5mg/L,SN04-31的最佳生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+IBA0.2mg/L。

6、r>　　 7.進行了楊樹無性系LN05-51葉片不定芽分化和無菌苗生根的卡那霉素敏感性試驗,確定了葉片分化的臨界濃度為20mg/L,生根的臨界濃度為15 mg/L。
　　 8.對轉(zhuǎn)化過程中農(nóng)桿菌的抑制試驗發(fā)現(xiàn)最佳的抑菌措施是在篩選培養(yǎng)基中添加頭孢霉素400mg/L,另在培養(yǎng)基表層覆蓋一層滅菌濾紙,并需要及時更換培養(yǎng)基。
　　 9.采用葉盤法,對無性系LN05-51進行了抗蟲基因Cry1C+9C的轉(zhuǎn)化,發(fā)現(xiàn)在共培培養(yǎng)基中