柔嫩艾美耳球蟲微線蛋白1(EtMIC1)的克隆表達及功能初步研究.pdf

1、雞球蟲病是嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)的一種寄生原蟲病，目前對于雞球蟲病采用的免疫控制技術得到越來越多的應用。由于雞球蟲活卵囊疫苗完全以雞體作為唯一制苗載體，普遍存在著弊端。因此，雞球蟲病的可持續(xù)控制期待著新型疫苗的研究開發(fā)。柔嫩艾美耳球蟲微線蛋白1(micronemeprotein，MIC1)基因是Tomley等人對柔嫩艾美耳球蟲的大量的表達序列標簽(ExpressedsequenetagsESTs)作分析后，鑒定出的微線蛋白基因，研究認為其是參與

2、球蟲入侵宿主細胞過程中的一種重要蛋白，但是否能夠對球蟲產生免疫保護，以及其如何產生免疫應答，目前尚無確切的研究數據。
　　 我們根據GeneBank上報道的MIC1基因序列，用RT-PCR技術克隆得到MIC1基因序列。然后應用基因工程技術，將MIC1基因序列以及該序列中的MIC1粘附結構域(MIC1-AD)分別克隆到原核表達載體pMAL-c2X中并轉化入大腸桿菌BL21(DE3)，通過IPTG誘導表達重組蛋白。SDS-PAGE電

3、泳顯示，表達的重組蛋白MIC1和MIC1-AD的分子量分別為116KDa左右和166KDa左右，與推導的氨基酸序列的大小相符。它們的IPTG誘導菌經超聲波裂解破碎，SDS-PAGE結果表明，它們的大部分表達產物在裂解液上清中。按pMAL-c2X表達系統(tǒng)純化操作手冊，經AmyloseResin層析獲得較高濃度的純化重組蛋白。
　　 將制備好的pMAL-c2X-MIC1、pMAL-c2X-MIC1-AD重組蛋白按所設計的實驗方案于7

4、、14、21日齡分別二次經胸部肌肉注射免疫嶺南黃雞。28日齡經口感染3×104新鮮的E.tenella孢子化卵囊。35日齡撲殺實驗雞，分別統(tǒng)計成活率、相對增重率等指標。動物實驗結果表明：2種重組蛋白均能降低卵囊產量，減輕盲腸病變，證實了MIC1-AD為MIC1的主要功能區(qū)域。其中，高劑量重組蛋白免疫效果優(yōu)于低劑量重組蛋白免疫效果。
　　 通過ELISA方法對免疫前、一免后、二免后、三免后及攻蟲后7d的動物血清進行抗體效價的測定，