生物科學(xué)畢業(yè)論文滸苔提取液對(duì)平菇菌絲生長的影響

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　　（20 屆）</b></p><p>　　滸苔提取液對(duì)平菇菌絲生長的影響</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物科學(xué)

2、 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b><

3、;/p><p><b>　　摘要I</b></p><p>　　AbstractII</p><p><b>　　引言1</b></p><p><b>　　1材料與方法2</b></p><p>　　1.1實(shí)驗(yàn)材料 灰平菇 滸苔2</

4、p><p>　　1.2試驗(yàn)器材2</p><p>　　1.3菌種培養(yǎng)基2</p><p>　　1.3.1斜面培養(yǎng)基2</p><p>　　1.3.2一級(jí)種子培養(yǎng)基2</p><p>　　1.3.3不同碳源配比培養(yǎng)基的制備2</p><p>　　1.4試驗(yàn)方法3</p&g

5、t;<p>　　1.4.1平菇菌種活化3</p><p>　　1.4.2不同碳源配比固體培養(yǎng)4</p><p>　　1.4.3不同碳源配比液體培養(yǎng)5</p><p><b>　　2結(jié)果與分析6</b></p><p>　　2.1不同濃度滸苔提取液對(duì)平菇菌絲伸長的影響6</p>

6、<p>　　2.2不同滸苔提取液對(duì)平菇菌絲生長量的影響10</p><p>　　3 小結(jié)12</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)13</b></p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　摘要</b></p><p>

7、　　[摘要] 本實(shí)驗(yàn)研究了不同濃度下滸苔提取液對(duì)平菇菌絲生長的影響，以平菇菌絲在固體培養(yǎng)條件下菌絲的生長速度以及液體培養(yǎng)條件下菌球的干重為檢驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明滸苔提取液可以充分代替葡萄糖作為菌株生長的碳源，并得出在固體和液體培養(yǎng)條件下，平菇菌絲都呈現(xiàn)拋物線生長趨勢(shì)：固體培養(yǎng)以60%的濃度最為適宜，菌絲生長最快，長勢(shì)好。0%-60%滸苔濃度下，菌絲生長速度隨著濃度增高而增高，反之，超過60%濃度，菌絲生長速度隨滸苔提取液濃度增

8、高而下降；在液體培養(yǎng)條件下，從拋物曲線可知80%滸苔濃度下的平菇菌絲干重量達(dá)到最大值，所以這個(gè)濃度最適合作為培養(yǎng)平菇的選擇。低于80%濃度，菌球干重隨濃度增加而增加，高于80%的濃度則反之。</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 平菇；菌絲生長；滸苔提取液</p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　[Abstract

9、] Enteromorpha extract was studied on solid and liquid culture conditions, differences in the growth of mushroom mycelium,the main reference for the different concentrations observed Enteromorpha Mycelium extract of the

10、growth of experimental data. Mainly in the mycelium growth rate, dry weight of bacteria to test the ball index, indicating that the extract of Enteromorpha can be fully replaced by the growth of glucose as carbon source

11、and strain obtained in the solid culture conditions</p><p>　　[Key words] Pleurotus ostreatus；mycelial growth；extracting solution</p><p><b>　　引言</b></p><p>　　眾所周知，食用菌已經(jīng)成

12、為我們?nèi)粘２穗戎胁豢苫蛉钡囊徊糠郑洳粌H味美而且營養(yǎng)豐富。早在1985年就有關(guān)于平菇全面詳細(xì)的營養(yǎng)成分的報(bào)告[1]，平菇中所含氨基酸總量約為干重的15%，每百克鮮品中含蛋白質(zhì)3.3g，脂肪0.3g，糖4.1g，纖維1.1g，灰分0.8g，鈣1mg，磷100mg，鐵0.7mg，鈉2mg，且含有大量維生素，如Vb、Vc等。平菇性微溫，味甘。具有滋養(yǎng)、補(bǔ)脾、養(yǎng)胃、除濕驅(qū)寒、舒筋活絡(luò)、和中潤腸，增進(jìn)食欲，提高人體免疫力等功效[2]。另外，平菇含

13、有豐富多糖，據(jù)研究表明多食用可以起到清除自由基，抗氧化的作用[3]，可以說是最天然的保健品。我國國內(nèi)對(duì)于平菇的研究涉及廣泛，主要研究菌絲生長、栽培料、出菇管理等方面。其中有涉及植物營養(yǎng)液、不同脂肪酸，青霉素，馬鈴薯芽和皮等對(duì)平菇菌絲生長的作用，但是對(duì)于滸苔提取液對(duì)食用菌這方面的研究暫時(shí)沒有。</p><p>　　滸苔為綠藻門綠藻綱石莼科的一屬，藻體成亮綠色或暗綠色，底棲生活，對(duì)海水溫度、鹽度、PH值和光照強(qiáng)度適應(yīng)

14、范圍廣[4]。近年來，由于全球變暖，大氣中二氧化碳含量增加，使得海水在與空氣交換時(shí)增加了碳的含量，由滸苔等海洋綠藻大量增殖而引起 “綠潮 ”的頻率和發(fā)生地理范圍呈增長趨勢(shì)。 2007年，中國黃海北部和中部局部海域首次發(fā)現(xiàn)了由滸苔大量增殖發(fā)生的綠潮，2008年 3月以來，在黃海北部和東海南部近岸局部海域也發(fā)生了孔石莼（Ulvapertusa）、滸苔大量增殖聚集的情況，6月 29日滸苔分布面積擴(kuò)展至 33 000 km2，幾乎分布到山東南部

15、黃海沿岸的大部分海區(qū)。</p><p>　　如何更有效的防治大型綠藻的爆發(fā)，一方面加強(qiáng)環(huán)境保護(hù)，做到預(yù)防準(zhǔn)備，另一方面就是加強(qiáng)合理的開發(fā)利用，變廢為寶。滸苔含有豐富的蛋白質(zhì)及活性物質(zhì)，沿海人民自古以來就有采集食用或用作飼料的習(xí)慣。而在以往的對(duì)滸苔研究中表明其富含多糖，如果說我們拿不同配比的滸苔提取液代替葡萄糖等作為平菇菌絲生長的碳源，平菇菌絲是否還會(huì)正常生長，還是說會(huì)長得比以往更好呢？為此，我們進(jìn)行了不同碳源配比

16、對(duì)固體和液體培養(yǎng)條件下平菇菌絲生長的影響的實(shí)驗(yàn)，看看滸苔提取液會(huì)帶給我們?cè)鯓拥捏@喜。</p><p><b>　　材料與方法</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)材料 灰平菇 滸苔</p><p><b>　　試驗(yàn)器材 </b></p><p><b>　　表1 試驗(yàn)儀器</b&g

17、t;</p><p>　　Tab 1 Tester</p><p><b>　　菌種培養(yǎng)基</b></p><p><b>　　斜面培養(yǎng)基 </b></p><p>　　PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g 、葡萄糖20g 、瓊脂20g 、水1000ml。</p><p>　　一級(jí)

18、種子培養(yǎng)基 </p><p>　　葡萄糖3％ 、蛋白胨0.2％ 、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.05% 、VB1 10 mg／L、酵母浸膏0.5%，調(diào)PH至 7.5 、水1000ml、瓊脂20g。</p><p>　　不同碳源配比培養(yǎng)基的制備</p><p>　　表2 不同碳源配比固體培養(yǎng)基（PH7.5, 500ml）</p><p&g

19、t;　　Tab2 differ carbon source match solid media（PH7.5, 500ml）</p><p>　　表3不同碳源配比液體培養(yǎng)基（500ml,PH7.5）</p><p>　　Tab3 differ carbon source match fluid nutrient mediu（500ml,PH7.5）</p><p>&

20、lt;b>　　試驗(yàn)方法</b></p><p><b>　　平菇菌種活化</b></p><p>　　試驗(yàn)前期準(zhǔn)備 </p><p>　　清潔50根試管 ，并且制作好棉塞配用。準(zhǔn)配好鐵架臺(tái)，架好分液裝置 （分液漏斗和橡膠管以及鐵夾）。新鮮土豆，牛皮紙，棉繩，刀，玻璃棒，搪瓷杯，電熱爐，紗布。</p><

21、;p>　　制備PDA斜面培養(yǎng)基 </p><p>　　按照1.3.1的配方，土豆去皮，切成薄片，稱取20g,放入自來水中煮沸30分鐘。用四層紗布過濾 ，棄其濾渣，分別加入葡萄糖和瓊脂慢慢攪拌使其溶解，注意瓊脂加入過程中水不要沸騰，邊加邊攪拌，以免其結(jié)塊導(dǎo)致培養(yǎng)基不均勻。全部溶解后加水定容到1000ml，調(diào)節(jié)PH至7.5</p><p><b>　　分裝 </b>

22、;</p><p>　　將配好的培養(yǎng)基分裝到試管里，每管分裝到試管的1/3，塞好棉塞，10管一捆用牛皮紙包好（注意牛皮紙光面朝外）待滅菌。</p><p><b>　　滅菌 </b></p><p>　　將捆好的培養(yǎng)基放入121℃的滅菌鍋中，滅菌20分鐘。超凈工作臺(tái)清潔，開啟紫外燈滅菌30分鐘。</p><p>&l

23、t;b>　　擺斜面 </b></p><p>　　等待冷卻后移至接種室接種。</p><p><b>　　接種 </b></p><p>　　用酒精擦洗手以及菌種試管外壁，打開酒精燈，接種耙在火焰上灼燒，左手分別執(zhí)菌種管和待接種管，帶耙冷卻，挖取0.5㎡大小的菌塊接種到待接種管，試管口過火焰塞上棉花。分別依次接滿50管。<

24、;/p><p><b>　　培養(yǎng) </b></p><p>　　放到28℃培養(yǎng)箱黑暗條件下培養(yǎng)并觀察。前兩天注意其有無污染，一有污染菌種，立馬拿出，培養(yǎng)5-7天，菌種相繼長滿試管。保藏以備下一步實(shí)驗(yàn)用。</p><p>　　不同碳源配比固體培養(yǎng)</p><p>　　實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作 </p><p&g

25、t;　　大離心管6個(gè)、250ml錐形瓶15個(gè)、培養(yǎng)皿35個(gè)、牛皮紙、棉塞、棉繩、電熱爐 電子天平、稱量紙、玻璃棒、搪瓷杯、量筒。</p><p><b>　　海藻提取液制備 </b></p><p>　　將0℃冰箱保藏的滸苔放入清水中，洗凈晾干至不滴水，以500g滸苔加500ml水的比例放入攪拌機(jī)中研磨（研磨一定要充分徹底）。研磨好的滸苔液放入離心管中，4000r

26、/m，10m.取其上清液，即是滸苔提取液。</p><p><b>　　準(zhǔn)備 </b></p><p>　　選好50個(gè)培養(yǎng)皿，洗凈，用報(bào)紙包好放入干燥箱中120℃干滅2-3小時(shí)。</p><p><b>　　配制培養(yǎng)基 </b></p><p>　　根據(jù)上述表格1.3.3.1中培養(yǎng)基配方制作不同碳源

27、配比的固體培養(yǎng)基。待水開后依次加入上述藥品，其中蛋白胨、酵母浸膏和瓊脂要充分?jǐn)嚢?，使培養(yǎng)基溶解均勻。</p><p><b>　　裝瓶和滅菌 </b></p><p>　　在高壓滅菌鍋中，121℃滅菌20分鐘。超凈工作臺(tái)紫外滅菌30分鐘。以備接種用。</p><p><b>　　倒平板和接種 </b></p>

28、<p>　　每個(gè)培養(yǎng)皿倒入25ml的培養(yǎng)液，待冷卻后從活化的PDA培養(yǎng)菌種取2塊大小相同的菌塊接入25ml的平板上，左右各一塊，均勻放置，每個(gè)梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù)，28℃培養(yǎng)一周，每天觀察菌絲濃密看其有無污染，一旦發(fā)現(xiàn)污染培養(yǎng)的立即撤出，以免污染到其他的培養(yǎng)基并及時(shí)補(bǔ)上。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)測(cè)定內(nèi)容 </b></p><p>　　每天觀察菌絲長

29、勢(shì)和它濃密情況，測(cè)量菌絲生長的半徑，記錄下每天生長的長度。</p><p>　　不同碳源配比液體培養(yǎng)</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作 </b></p><p>　　150ml培養(yǎng)瓶35個(gè)、電熱爐、電子天平、稱量紙、玻璃棒、量筒。</p><p><b>　　配制培養(yǎng)液 </b><

30、;/p><p>　　根據(jù)上述表格1.3.3.2的營養(yǎng)配方，配出不同碳源配比的液體培養(yǎng)液，每瓶分裝50ml,每個(gè)梯度重復(fù)3次。</p><p><b>　　滅菌 </b></p><p>　　將配好的培養(yǎng)液放入高壓滅菌鍋中120℃，滅菌20分鐘。超凈工作臺(tái)紫外滅菌30分鐘。</p><p><b>　　接種及培養(yǎng)

31、 </b></p><p>　　從活化的PDA培養(yǎng)菌種上取2塊 0．5 cm2的菌塊，接入 150 mL三角瓶中（注意生長菌絲面朝上），設(shè)置3個(gè)重復(fù)，靜置2 d后在28℃、180 rpm 培養(yǎng)5~15天，每日觀察其生長情況，一旦發(fā)現(xiàn)污染立即補(bǔ)上。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)測(cè)定內(nèi)容 </b></p><p>　　每天觀察并記

32、錄菌球長勢(shì)，待菌球長滿培養(yǎng)液。測(cè)定菌絲生物量，取25 mL搖瓶培養(yǎng)物，用蒸餾水清洗，真空抽濾，重復(fù)2次。而后收集菌絲體，60℃下烘干至恒重，電子天平稱重。</p><p><b>　　結(jié)果與分析</b></p><p>　　不同濃度滸苔提取液對(duì)平菇菌絲伸長的影響</p><p>　　以下為在不同濃度滸苔溶液處理的固體培養(yǎng)基上菌絲的生長情況，表4

33、-9分別為1-5天菌絲的生長情況。</p><p>　　表4菌絲生長測(cè)定（1d）</p><p>　　Tab4 hypha growth mensuration(1d)</p><p>　　菌絲生長第一天，基本上生長長度在0.1000-0.3000mm，只有60%滸苔濃度下的培養(yǎng)基生長較為突出，達(dá)到0.4099mm。菌絲生長緩慢，還未能比較不同濃度間的優(yōu)勢(shì)，有0%濃

34、度的一個(gè)培養(yǎng)基一側(cè)的菌塊被污染。</p><p>　　表5菌絲生長測(cè)定（2d）</p><p>　　Tab5 hypha growth mensuration(2d)</p><p>　　菌絲生長第二天，菌絲長勢(shì)旺盛。生長長度是第一天生長長度的一倍之多，菌絲潔白，無其他污染出現(xiàn)。</p><p>　　表6菌絲生長測(cè)定（3d）</p>

35、;<p>　　Tab6 hypha growth mensuration(3d)</p><p>　　菌絲生長第三天，平菇菌絲的生長已經(jīng)逐步趨于最快期?？梢钥闯鲞€是60%濃度下的生長速度最快，20%濃度下的生長相對(duì)慢。兩菌塊之間菌絲生長碰觸到一塊了。</p><p>　　表7菌絲生長測(cè)定（4d）</p><p>　　Tab7 hypha growth

36、mensuration(4d)</p><p>　　菌絲生長第四天，長勢(shì)強(qiáng)，菌絲生長均勻，逐漸長滿平板，別是60%濃度下的平板幾乎已被鋪平。</p><p>　　表8菌絲生長測(cè)定（5d）</p><p>　　Tab8 hypha growth mensuration(5d)</p><p>　　菌絲生長第五天，菌絲生長速度緩和。</p&

37、gt;<p>　　表9 5天菌絲生長量比較</p><p>　　Tab9 five sky hypha increment COMPare</p><p>　　表10 5天菌絲生長速率比較</p><p>　　Tab10 five sky hypha growth rate COMPare</p><p>　　圖1： 不同滸苔提

38、取液濃度對(duì)菌絲生長速率的影響</p><p>　　Figure 1: Enteromorpha proliferadiffer sea grass extracting solution strength versus hypha growth rate 'impact</p><p>　　效果展示圖：滸苔提取液濃度60%（左）和20%（右）</p><p>

39、;　　Rendering map: Enteromorpha extract concentration 60% (left) and 20% (right)</p><p>　　效果展示圖：滸苔提取液濃度80%（左）和10%（右）</p><p>　　Rendering map: Enteromorpha extract concentration of 80% (left) and 1

40、0% (right)</p><p>　　效果展示圖：七個(gè)不同梯度滸苔提取液培養(yǎng)下的平菇菌絲</p><p>　　Rendering map: seven different gradient Enteromorpha extract of P. ostreatus under cultivation</p><p>　　該實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組分別是0%和100%，兩者之間

41、分別再設(shè)置了5個(gè)梯度，可以從圖表1中看出在這七個(gè)梯度下，平菇菌絲都能正常生長，除了個(gè)別受污染之外。</p><p>　　不同滸苔濃度菌絲生長速度60%最快，40%和80%次之。在不同濃度的滸苔提取液中，富含40%-60%的滸苔提取液的培養(yǎng)基中菌絲生長速度明顯快于其他濃度的培養(yǎng)基。</p><p>　　平菇菌絲生長的周期在5-7天，生長速度呈拋物線趨勢(shì)，在第三天進(jìn)入頂峰時(shí)期，第一天基本不生長

42、，最后兩天基本停止生長。</p><p>　　不同滸苔提取液對(duì)平菇菌絲生長量的影響</p><p>　　表11不同滸苔提取液對(duì)滸苔菌絲生長量的影響</p><p>　　Tab11 differ Enteromorpha prolifera extracting solution versus Enteromorpha prolifera hypha incremen

43、t 'impact</p><p>　　圖2 不同滸苔培養(yǎng)液濃度對(duì)菌絲干重的影響</p><p>　　Fig2 differ Enteromorpha prolifera culture fluid strength versus hypha dry weight 'impact</p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：不同濃度滸苔提取液的液體菌種（左）和

44、不同濃度滸苔提取液培養(yǎng)下的菌球干重</p><p>　　The results show: different concentrations of liquid extract of Enteromorpha species (left) and different concentrations of EP extracts of bacteria cultured in dry weight of the ba

45、l</p><p>　　滸苔提取液在固體培養(yǎng)條件下可代替葡萄糖作為平菇菌絲生長所需碳源，液體培養(yǎng)下，不同濃度滸苔提取液，生長趨勢(shì)呈現(xiàn)拋物線型。</p><p>　　從拋物線的趨勢(shì)可以看出平菇菌絲在80%滸苔提取液濃度左右，其干重質(zhì)量處于最高點(diǎn)。</p><p>　　60%濃度下的菌球大小均勻，密度高，80%次之。</p><p>　　由本實(shí)驗(yàn)

46、結(jié)果可以得出，在不同濃度的滸苔提取液中，固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)下平菇菌絲均能正常生長，因滸苔富含多糖，利于平菇吸收，使得平菇生長更快。且在滸苔濃度為40%-80%時(shí)，對(duì)平菇生長最佳。即適當(dāng)?shù)臐G苔可以取代葡萄糖的位置，從而更好的利用了滸苔，減少成本。</p><p><b>　　3小結(jié)</b></p><p>　　食用菌是可供人們食用的大型真菌的統(tǒng)稱。我國是世界上認(rèn)識(shí)和栽培

47、食用菌最早的國家，同時(shí)也是世界上食用菌最大的生產(chǎn)國、出口國和消費(fèi)國[ 1 ]。食用菌營養(yǎng)豐富，風(fēng)味獨(dú)特，含有多種生理活性物質(zhì)，不僅具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，而且還具有重要的醫(yī)療保健功能，被人們公認(rèn)為“健康食品”。 </p><p>　　其中，平菇(P leurotus ostreatus)是廣泛栽培的食用菌之一[ 1 ] 。平菇營養(yǎng)豐富、味道鮮美, 是市場(chǎng)上最常見且銷量較好的一種食用菌蔬菜。由于平菇性味甘、溫, 具有追

48、風(fēng)散寒、舒筋活絡(luò)的功效。另外平菇中的多糖對(duì)癌細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制作用, 能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。因此常食平菇不僅能起到改善人體的新陳代謝, 調(diào)節(jié)植物神經(jīng)的作用, 而且對(duì)減少人體血清膽固醇、降低血壓和防治肝炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、高血壓等有明顯的效果。另外對(duì)預(yù)防癌癥、調(diào)節(jié)婦女更年期綜合征、改善人體新陳代謝、增強(qiáng)體質(zhì)都有一定的好處[14] 。有研究表明，其經(jīng)過人體長期使用和動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)證明口服無毒或毒性很小，所以平菇多糖可以說是幾乎毒副作用的。&

49、lt;/p><p>　　我國滸苔資源十分豐富, 僅在福建沿海每年的產(chǎn)量就在10萬t以上, 養(yǎng)殖海域中一年四季均可發(fā)生。我們利用滸苔作為培養(yǎng)基的原料可以大大的利用滸苔，500g的滸苔可以制作500ml滸苔提取液，利用率高。而且材料來源方便，制作工藝簡(jiǎn)單，濾渣可以另作肥料，有效地實(shí)現(xiàn)資源再利用。如果擴(kuò)大規(guī)?；?，從一定程度上減緩了滸苔大爆發(fā)帶給沿海地區(qū)的壓力。</p><p>　　通過試驗(yàn)得出如下結(jié)

50、論，不同滸苔濃度菌絲生長速度60%最快，40%和80%次之。在不同濃度的滸苔提取液中，富含40%-60%的滸苔提取液的培養(yǎng)基中菌絲生長速度明顯快于其他濃度的培養(yǎng)基。平菇菌絲生長的周期在5-7天，生長速度呈拋物線趨勢(shì)，在第三天進(jìn)入頂峰時(shí)期，第一天基本不生長，最后兩天基本停止生長。</p><p>　　滸苔提取液在固體培養(yǎng)條件下可代替葡萄糖作為平菇菌絲生長所需碳源，液體培養(yǎng)下，不同濃度滸苔提取液，生長趨勢(shì)呈現(xiàn)拋物線型

51、。</p><p>　　從拋物線的趨勢(shì)可以看出平菇菌絲在80%滸苔提取液濃度左右，其干重質(zhì)量處于最高點(diǎn)。</p><p>　　60%濃度下的菌球大小均勻，密度高，80%次之。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　李涵莊. 平菇營養(yǎng)成分的分析[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 1985

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