芳胺及芳烴胺類藥物的分析

1、第七章　芳香胺類藥物的分析,芳胺類: 酰胺類、對(duì)氨基苯甲酸酯類,芳烴胺類藥物指氨基在烴基側(cè)鏈上,苯乙胺類、苯丙胺類藥物,第一節(jié) 芳胺類藥物的分析一、對(duì)氨基苯甲酸酯類,,具有對(duì)氨基苯甲酸酯基本結(jié)構(gòu)具有游離的芳伯氨基。,1．結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：,代表藥物有：,,,,鹽酸普魯卡因,苯佐卡因,鹽酸丁卡因,2．性質(zhì)：,①  芳伯氨基特性 具有芳伯氨基，可發(fā)生重氮化—偶合反應(yīng)；可與芳醛發(fā)生縮合反應(yīng)，易氧化變

2、色。,② 水解特性 具有酯鍵，易發(fā)生水解。水解的快慢受光線、溫度或堿性條件影響。,③  弱堿性 脂烴胺側(cè)鏈為叔胺氮原子，故具有弱堿性；可與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)；可在非水溶劑中被滴定 ④   紫外吸收 具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有紫外吸收 ⑤紅外吸收,1.結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：,,苯胺酰基衍生物，酰胺基鄰位或?qū)ξ挥腥〈?,二、酰胺類,,代表藥物有：,,,對(duì)乙酰氨

3、基酚,鹽酸利多卡因,2．性質(zhì)：,利多卡因，酰胺基鄰位上有兩個(gè)甲基，有很大空間位阻，水解較為困難。（利多卡因在80%的硫酸溶液中加熱才能水解）,①   水解后可發(fā)生重氮化反應(yīng)具有酰胺結(jié)構(gòu)—共性。水解成芳伯氨基，發(fā)生重氮化偶合反應(yīng)。,②  水解產(chǎn)物易酯化：酯鍵或酰胺鍵易水解,③  與FeCl3反應(yīng) 具有酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基，可與FeCl3作用呈色。,④ 堿性利多卡

4、因側(cè)鏈中具有叔氨N原子，顯弱堿性，能與酸成鹽，且能與生物堿沉淀試劑或重金屬離子反應(yīng)。,三、鑒別反應(yīng) 1、重氮化-偶合反應(yīng) 具有芳伯氨基藥物，如鹽酸普魯卡因等，在酸性溶液中與NaNO2發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與堿性?-萘酚偶合產(chǎn)生紅色偶氮化合物。,直接反應(yīng)：苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、 鹽酸普 魯卡因胺,,間接反應(yīng)：對(duì)乙酰氨基酚、醋氨苯砜,利多卡因和布比卡因由于空間位阻很難發(fā)生此反應(yīng)。,鹽酸丁

5、卡因（芳香第二胺結(jié)構(gòu)）與 NaNO2作用生成乳白色N-亞硝基化合物沉淀。,2、三氯化鐵反應(yīng) 具有酚羥基（如對(duì)乙酰氨基酚），可與FeCl3作用顯藍(lán)紫色。,3、與重金屬離子的反應(yīng) 具有烴胺側(cè)鏈，與生物堿沉淀試劑反應(yīng). 根據(jù)沉淀顏色或測(cè)定沉淀熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。,,,,(1)．與銅離子的反應(yīng),(2)．與鈷鹽反應(yīng),（3）羥肟酸鐵的反應(yīng),,具有芳酰胺結(jié)構(gòu)，被H2O2氧化成羥肟酸，羥肟 酸與FeCl3反應(yīng)生成紫紅色羥肟酸

6、鐵，隨即 變?yōu)榘底厣磷睾谏?。如鹽酸普魯卡因胺。,具有酰胺結(jié)構(gòu)的藥物,羥肟酸,羥肟酸鐵,（4）與汞離子反應(yīng),鹽酸普魯卡因的鑒別,4、水解產(chǎn)物反應(yīng),,苯佐卡因的水解反應(yīng),,,5、制備衍生物測(cè)熔點(diǎn),三硝基苯酚衍生物,鹽酸利多卡因 ChP（2005）[鑒別] 取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚試液10ml，即生成沉淀；濾過，沉淀用水洗滌后，干燥，依法測(cè)定（附錄ⅥC），熔點(diǎn)為228～232

7、℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。鹽酸布比卡因 ChP（2005）,,利多卡因和布比卡因,硫氰酸鹽衍生物,鹽酸丁卡因 ChP（2005） [鑒別] （1）取本品約0.1g，加5%醋酸鈉溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸銨溶液1ml，即析出白色結(jié)晶；濾過，結(jié)晶用水洗滌，在80℃干燥，依法測(cè)定（附錄ⅥC），熔點(diǎn)約為131℃。,,6、UV,鹽酸布比卡因 ChP（2005）[鑒別] （2）取本品，精密稱定，按干燥品

8、計(jì)算，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附錄ⅣA）測(cè)定，在263nm與271nm的波長處有最大吸收；其吸收度分別為0.53－0.58與0.43－0.48。,7、紅外吸收光譜法,利用化合物結(jié)構(gòu)中特殊基團(tuán)的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)等紅外活性振動(dòng)產(chǎn)生的紅外吸收峰對(duì)藥物進(jìn)行鑒別的方法。要求能夠?qū)R圖中的cm-1（σ）進(jìn)行正確的歸屬。,四、特殊雜質(zhì)檢查1、對(duì)乙酰氨基酚雜質(zhì)檢查 對(duì)乙酰氨基酚中除檢查

9、酸度、氯化物、硫酸鹽、重金屬、水分、熾灼殘?jiān)纫话汶s質(zhì)外，還需要檢查：乙醇溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)（對(duì)氯乙酰苯胺） 、對(duì)氨基酚等特殊雜質(zhì)。,對(duì)乙酰氨基酚以對(duì)硝基氯苯為原料合成。,(1)．乙醇溶液的澄清度與顏色 對(duì)乙酰氨基酚易溶于乙醇中，如乙醇液不澄清或有顏色，則說明有雜質(zhì)存在。 生產(chǎn)工藝用鐵粉作還原劑，如帶入成品，則導(dǎo)致對(duì)乙酰氨基酚乙醇溶液產(chǎn)生渾濁。 中間體對(duì)氨基酚有色氧化物在乙醇中顯橙紅色或棕色。,（2）

10、有關(guān)物質(zhì)（對(duì)氯乙酰苯胺）,,,,,,,,,對(duì)硝基氯苯為原料合成對(duì)乙酰氨基酚時(shí)，如發(fā)生這樣的副反應(yīng)就能夠引入對(duì)氯乙酰苯胺。,副反應(yīng),,TLC法①   樣品液,,②   對(duì)照液對(duì)氯乙酰苯胺乙醚溶液（50?g/ml）,③   分離系統(tǒng)硅膠GF254氯仿-丙酮-甲苯（13∶5∶2）,⑥   限量:,,,④ 點(diǎn)樣量樣品液：200?l

11、 點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上對(duì)照液：40?l,⑤   判斷在254nm波長紫外燈下觀察，供試品與對(duì)照品主斑點(diǎn)Rf值相同的斑點(diǎn)比較,不得超過其大小與顏色。,(3)．對(duì)氨基酚 制備中乙?；煌耆蛸A存不當(dāng)發(fā)生水解都能引入對(duì)氨基酚☆檢查原理： 對(duì)氨基酚在堿性條件下，與亞硝基鐵氰化鈉作用，生成藍(lán)色絡(luò)合物，與對(duì)照液比較判斷對(duì)氨基酚的限量。,,四、含量測(cè)定（一）亞硝酸

12、鈉滴定法1.  原理 具有芳伯氨基藥物，在酸性條件下與NaNO2反應(yīng)生成重氮鹽，根據(jù)消耗NaNO2量，計(jì)算出含量。潛在芳伯氨基藥物，如芳酰氨基、硝基等，可先水解或還原，得芳伯氨基后，再進(jìn)行測(cè)定。,,,,2.  操作中的主要條件＊重氮化反應(yīng)屬于分子反應(yīng)＊滴定液NaNO2及反應(yīng)生成的重氮鹽都不穩(wěn)定＊反應(yīng)速度受多種因素影響,,第一步反應(yīng)速度比較慢，而后兩步反應(yīng)速度則比較快。,,（1）．加入溴化鉀加快反應(yīng)速

13、度,重氮化反應(yīng)機(jī)制：,a. 當(dāng)苯環(huán)上特別是氨基鄰位或?qū)ξ簧嫌形娀鶗r(shí),如,,,,,吸電基通過誘導(dǎo)效應(yīng)使氨基 上電子云密度降低，從而堿 性降低，游離芳伯胺濃度增 大，所以反應(yīng)速度就快。,等可使氨基的堿性降低，重氮化反應(yīng)速度加快。,b.  當(dāng)在苯環(huán)上有供電基時(shí)，則使反應(yīng)速度降低。如 等。,,,,供電基能使氨基堿性增強(qiáng)，這樣氨基成鹽的機(jī)會(huì)就增大，游離芳伯胺的濃

14、度就減小，所以反應(yīng)速度就慢。,（2）．反應(yīng)速度與酸及酸度的關(guān)系a.酸的種類重氮化反應(yīng)在HBr、HCl、H2SO4中反應(yīng)速度是 HBr＞HCl＞H2SO4,,,K1比K2大300倍,用HBr時(shí)，生成NOBr量大，反應(yīng)速度快。 但HBr價(jià)格貴，用鹽酸代替，為加快反應(yīng)速度，需加入KBr（催化劑）。,,產(chǎn)生HBr與HNO2反應(yīng)，可生成大 量NOBr，加快反應(yīng)速度。,b.    

15、60; 鹽酸的用量理論上: 芳胺∶鹽酸＝1∶1mol 實(shí)際上: 芳胺∶鹽酸＝1∶2.5~6mol,原因：＊強(qiáng)酸性可加速反應(yīng)＊重氮鹽在酸性下穩(wěn)定＊酸性下避免副反應(yīng)發(fā)生。,如鹽酸量增加，則反應(yīng)向左進(jìn)行。 如鹽酸濃度太大，反到會(huì)使游離芳伯氨的量減?。ǔ甥}），而影響重氮化反應(yīng)速度，使反應(yīng)速度減慢。,如酸度不足則沒反應(yīng)的芳胺與生成的重氮鹽產(chǎn)生偶氮氨基化合物，而影響測(cè)定結(jié)果。,（3）反應(yīng)速度與滴定時(shí)溫度的關(guān)

16、系 一般，溫度升高反應(yīng)速度加快。但重氮化反應(yīng)所生成的重氮鹽不穩(wěn)定，溫度升高重氮鹽分解速度也加快。另外，溫度高時(shí)，滴定液亞硝酸鈉也容易分解逸失，而影響測(cè)定結(jié)果。所以，重氮化反應(yīng)應(yīng)在低溫條件下進(jìn)行。,中國藥典規(guī)定：在30?C以下，把滴定管尖端插入液面下 進(jìn)行滴定。在滴定時(shí)一邊攪拌一邊加入大部分標(biāo)準(zhǔn)溶液。,到近終點(diǎn)時(shí)把滴定管提出液面，用水沖洗后再繼續(xù)滴定至終點(diǎn)。,標(biāo)準(zhǔn)溶液在液面下加入，可避免HNO2揮發(fā)。,（4）反應(yīng)速度

17、與滴定速度的關(guān)系 重氮化反應(yīng)屬分子反應(yīng)，反應(yīng)速度比較慢，滴定速度不能過快。 尤其是近終點(diǎn)時(shí)，更要慢慢地滴定。近終點(diǎn)時(shí)，游離芳伯胺濃度非常低，反應(yīng)速度就更慢了。 所以，每加一滴標(biāo)準(zhǔn)液后，要攪拌1~5分鐘后再判斷終點(diǎn)。,3. 指示終點(diǎn)的方法 (1) 用停滴定法 溶液 檢流計(jì) 終點(diǎn)前： 無過量 無電流

18、 HNO2 終點(diǎn)時(shí)：有過量 有電流（使指針偏離零 HNO2 永停在某一位置） (2) 外指示劑法 用KI-淀粉指示劑 指示終點(diǎn)的原理： 2NaO2 + 2KI + 4HCl 2N

19、O + I2 + 2KCl + 2NaCl + 2H2O,,,,,,,,,（二）非水溶液滴定法 脂烴胺側(cè)鏈，具弱堿性,（三）紫外分光光度法 對(duì)乙酰氨基酚在0.4％氫氧化鈉溶液中，于257nm波長處有最大吸收，其紫外吸收光譜特征，可用于其原料及其制劑的含量測(cè)定。,對(duì)乙酰氨基酚的含量測(cè)定：取本品42mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10

20、0ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻。在1cm的吸收池中，照分光光度法在257nm的波長處測(cè)定吸收度為0.572。按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計(jì)算。求對(duì)乙酰氨基酚的百分含量？,（四）HPLC法 鹽酸普魯卡因注射液 可同時(shí)測(cè)定鹽酸普魯卡因及其降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸；離子抑制色譜法 外標(biāo)法定量（五）體內(nèi)藥物分析 高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定血漿中普魯卡因、利多卡因、丁卡因和布比卡因,,高

21、效毛細(xì)管電泳測(cè)定幾種局麻藥,電泳分析條件：40 mmol/l的H3PO4-Tris buffer pH=5.0毛細(xì)管：59 cm×70μm柱溫：18℃壓力進(jìn)樣：3Kpa×5s工作電壓：20 KV檢測(cè)波長：220 nm,分析樣品的處理：血漿→堿化→乙醚：二氯甲烷萃取→離心→揮干有機(jī)溶劑→緩沖溶液溶解殘?jiān)M(jìn)樣分析,第二節(jié) 苯乙胺類藥物分析一．結(jié)構(gòu)特點(diǎn),具有烴胺側(cè)鏈，屬于芳烴胺類藥物。多數(shù)在苯環(huán)上有1~

22、2個(gè)羥基取代基。,代表藥物,腎上腺素,去甲腎上腺素,二．性質(zhì)：1.   易被氧化 鄰苯二酚或苯酚結(jié)構(gòu)，可與重金屬離子絡(luò)和呈色；易被氧化呈色。,3.   具有旋光性 具有手性碳原子，具有光學(xué)活性。,2.   顯堿性 具有烴胺側(cè)鏈（仲氨），顯弱堿性。能與酸成鹽。,三．鑒別試驗(yàn) 1、三氯化鐵反應(yīng)(酚羥基)： 在0.1mol/L鹽酸中與Fe3+顯翠綠色，加氨試

23、液后，顯紫色或紫紅色 2、甲醛-硫酸反應(yīng) 本類藥物與甲醛硫酸反應(yīng)生成具有醌式結(jié)構(gòu)的有色物質(zhì),,,3、氧化反應(yīng) 4、紫外分光光度法與紅外分光光度法,5、與亞硝基鐵氰化鈉的反應(yīng)（Rimini試驗(yàn)）脂肪伯氨基＋亞硝基鐵氰化鈉＋丙酮＋碳酸氫鈉 →紅紫色6、雙縮

24、脲反應(yīng)：氨基醇結(jié)構(gòu)與硫酸銅的反應(yīng) 鹽酸麻黃堿+硫酸銅→藍(lán)紫色+乙醚,三、腎上腺素中酮體的檢查,四、含量測(cè)定（一）   非水溶液滴定法 利用本類藥物分子中側(cè)鏈脂烴胺的堿性。 溶劑：冰醋酸－醋酐 指示劑：結(jié)晶紫；滴定劑：高氯酸；終點(diǎn)判斷：顯藍(lán)綠色 注意：氫鹵酸鹽需用醋酸汞消除干擾。含氨基的藥物如果需加入醋酐，應(yīng)在加入冰HAc溶解放冷后再加醋酐，防止氨基被乙?；?（二）、溴量法：

25、以鹽酸去氧腎上腺素為例。1）原理： Br2+2KI→2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 →2NaI + Na2S4O62)操作要點(diǎn)①游離溴及碘極易揮散，操作過程中防逸失②不能加入太過量的溴液，以防酚羥基氧化或溴化。一般以過量2％為宜。③平行條件作空白，校正操作中溴及碘揮發(fā)。,（三）提取中和法1．基本原理 利用藥物鹽的形式可溶于水,游離藥物不溶于水而溶于有機(jī)溶劑

26、的性質(zhì)進(jìn)行提取，然后進(jìn)行滴定的方法。,4、紫外分光光度法與比色法 5、高效液相色譜法 6、體內(nèi)藥物分析,,第三節(jié) 苯丙胺類藥物的分析一、苯丙胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型性質(zhì),馬來酸依那普利,西拉普利,二、主要性質(zhì),1、酸堿兩性：仲胺和羧基2、具某些氨基酸特性：茚三酮反應(yīng)3、光學(xué)活性：旋光性4、水解：,,三、鑒別 熔點(diǎn)測(cè)定 高錳酸鉀反應(yīng)：加硫酸溶解遇高錳酸鉀，紅色消失 溴-間苯二酚：加溴水顏色消失后，溴