液相柱子的使用及維護

1、答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。2.對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進行活化及維護？為什么要這樣做？答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其

2、重要。因為分子量高的物質(zhì)分子，擴散速度慢，平衡所需時間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單，多進幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩(wěn)定，再進行正式進樣測定。如果要加快平衡時間，把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。3.測定多肽，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？答：分子量不

3、高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。4.氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？答：氨基柱測酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負電荷的氨基官能團質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用510倍的柱體積的含0.51.0％NH3的乙腈水(50:50)溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)

4、然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。還是裝一個預(yù)柱。8.如果柱子取下來放置一段時間，需要做什么保護嗎？答：對于一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做特殊的保護。9.流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什么？答：《高效液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說：甲醇為質(zhì)