新生兒促甲狀腺素的時(shí)間分辨熒光免疫分析及其試劑盒研制

1、新生兒促甲狀腺素的時(shí)間分辨熒光免疫分析及其試劑盒研制新生兒促甲狀腺素的時(shí)間分辨熒光免疫分析及其試劑盒研制譚玉華，馮健明，盧順舵，羅建安，李建國，季濤，李貴情（廣州市豐華生物工程有限公司，廣州510730）摘要：目的摘要：目的利用時(shí)間分辨熒光免疫分析（TrFIA）技術(shù)，建立新生兒促甲狀腺素（NeonatalTSH）微量檢測法，并研制其檢測試劑盒。方法方法采用了一株TSH單克隆抗體用于固相包被，另一株TSH單克隆抗體用于標(biāo)記銪（Eu3），固

2、相雙抗體夾心時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測NeonatalTSH。結(jié)果結(jié)果自建的NeonatalhTSHTrFIA法靈敏度高可達(dá)2.28Uml，且在測量范圍內(nèi)，自制試劑盒劑量反應(yīng)曲線的相關(guān)系數(shù)r達(dá)0.9987。與hLH、hFSH、HCG無明顯交叉反應(yīng)。分析內(nèi)或分析間質(zhì)控結(jié)果在靶值25%內(nèi)，室內(nèi)低質(zhì)控、高質(zhì)控分析內(nèi)和分析間變異系數(shù)(CV)分別為7.12%和6.09%，7.82%和7.03%。與DELFIANeonatalTSH試劑標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行準(zhǔn)

3、確性比對實(shí)測值與標(biāo)示效價(jià)比平均值為1.05。與DELFIANeonatalTSH試劑比對試驗(yàn)符合率一致，相關(guān)性系數(shù)r可達(dá)0.9822。試劑盒室間質(zhì)評能力比對成績100%。結(jié)論結(jié)論自建的NeonatalTSHTrFIA法具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，精密性好和非放射性等優(yōu)點(diǎn)，具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：新生兒；促甲狀腺素；時(shí)間分辨熒光免疫分析TimeresolvedTimeresolvedFluoimmunoassayFl

4、uoimmunoassayofofNeonatalNeonatalHypothyropinHypothyropinPreparationPreparationofofIt’sIt’sTestTestReagentReagentTanYuhuaFengJianmingLuShunduoLuoJiananLiJianguoJiTaoLiGuiqing(GuangzhouFenghuaBioengineeringCo.LTDGuangzhou

5、510730China)Abstract:Abstract:ObjectiveObjectiveToestablishamethodofTimeresolvedFluoimmunoassay(TrFIA)fthequantitativedeterminationofhumanthyroidstimulatinghmone(hTSH)inbloodspecimensdiredonfilterpaperasanaidinscreeningn

6、ewbnsfneonatalhypothyroidismtoprepareit’stestreagent.MethodsMethodsThemethodbasedonsolidphaseswichTrFIAfNeonatalHypothyropin(NeohTSH)whichusedtwoantiTSHmonoclonalantibodyonewascoatedonmicroplatesanotherwaslabeledbyEuropi

7、um.ResultsResultsTheassaysensitivityofthemethodwas2.28Uml.Thecrelationcoefficientofselfmadekit’scurvewas0.9987.Therewasnoobviouscrossreactiontohumanluteinizinghmone(hLH)humanfolliclestimulating(hFSH)humanchionicgonadotro

8、pin(HCG).The1.4固相抗體包被板的制備將包被抗體用50mmolLpH4.6檸檬酸緩沖液稀釋至3.00gml，在96孔微孔板各孔中加200l，4℃過夜，棄去包被液，洗滌1次，每孔加280l含有10.0gLBSA的10mmolLpH7.2磷酸鹽緩沖液，37℃封閉2h，棄去封閉液，真空抽干過塑冷藏。1.5銪標(biāo)記物的制備將1mg的標(biāo)記抗體加入含有1mg的Eu3凍干粉小瓶中，室溫振蕩反應(yīng)48h。反應(yīng)液經(jīng)用50mmolLpH7.80Tr

9、isHCl緩沖液平衡的SepharoseCL6B柱（1cm40cm）層析，A280監(jiān)測收集第一洗脫峰。1.6建立NeohTSHTrFIA檢測方法采用雙抗體夾心法，將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或樣本用打孔器打下直徑約3.2mm樣品盤于固相抗體包被板中，再加入用分析緩沖液1：1200稀釋的銪標(biāo)記物200l室溫振蕩4h（室溫法）或室溫振蕩15min后置于4℃過夜孵育再室溫振蕩1h（過夜法），洗滌6次，加入增強(qiáng)液200l，振蕩5min后，于1420時(shí)間分辨

10、儀上用隨機(jī)配備的Wkstation軟件熒光計(jì)數(shù)和用Multicalc軟件進(jìn)行擬合分析。1.7Perkimelmer公司DELFIANeonatalTSH檢測方法嚴(yán)格按儀器和試劑說明書操作檢測。1.8評價(jià)參數(shù)評價(jià)試劑盒的分析靈敏度、分析特異性、準(zhǔn)確性、精密度，建立試劑盒的參考值，并與國外同類產(chǎn)品進(jìn)行比對試驗(yàn)。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理NeonatalTSHTrFIA標(biāo)準(zhǔn)曲線分析（有效劑量（ED）、變異系數(shù)（CV）等）及結(jié)果由VictTM2D1420