水產(chǎn)品中己烷雌酚_己烯雌酚與雙烯雌酚殘留的毛細管電泳測定

1、第29卷第1期2010年1月分析測試學(xué)報FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)Vol129No1155～58收稿日期:20091009修回日期:20091125基金項目:中國博士后基金資助項目(20070420688)福州大學(xué)科研啟動基金資助項目(0460022233)第一作者:林子俺(1977)男福建福州人講師博士Tel:059187893175Email:zalin@fzu1e

2、du1cn水產(chǎn)品中己烷雌酚、己烯雌酚與雙烯雌酚殘留的毛細管電泳測定林子俺龐紀磊黃慧鄭江南張?zhí)m(福州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院食品安全分析與檢測教育部重點實驗室福建福州350002)摘要:建立了毛細管電泳紫外檢測法測定水產(chǎn)品中己烷雌酚(HXS)、己烯雌酚(DES)及雙烯雌酚(DIES)殘留的新方法。研究了緩沖體系的酸度、濃度、添加劑、分離電壓、進樣時間及溫度等對組分分離的影響。在檢測波長為200nm分離電壓為20kV運行緩沖液為50mmolL硼砂2

3、5mmolL氫氧化納(pH1213含30%的NN2二甲基甲酰胺)的條件下3種目標組分在14min內(nèi)達到基線分離。HXS、DES與DIES的質(zhì)量濃度與峰面積分別在210～120、110～100、110～100mgL范圍內(nèi)呈良好線性相關(guān)系數(shù)(r2)分別為019998、019992、019994檢出限為013～019mgL。將該方法用于鯽魚中3種雌酚類激素的檢測結(jié)果令人滿意。關(guān)鍵詞:毛細管電泳水產(chǎn)品己烷雌酚己烯雌酚雙烯雌酚中圖分類號:O657

4、18R97711文獻標識碼:A文章編號:10044957(2010)01005504doi:1013969j1issn110044957120101011013DeterminationofHexestrolDiethylstibestrolDienestrolResiduesinAquaticProductbyCapillaryElectrophesisLINZi2anPANGJi2leiHUANGHuiZHENGJiang2nanZ

5、HANGLan(KeyLabatyofAnalysisDetectionfFoodSafetyMinistryofEducationDepartmentofChemistryFuzhouUniversityFuzhou350002China)Abstract:Afacilemethodwasdevelopedfsimultaneousdeterminationofhexestrol(HXS)dieth2ylstibestrol(DES)

6、dienestrol(DIES)residuesinaquaticproductbasedoncapillaryelectrophe2siscoupledwithultravioletdetection.Theinfluencesofsomeimptantfactssuchasadditiveacidityconcentrationofrunningbufferseparationvoltageinjectiontimetemperat

7、ureweresystemicallyinvestigated.Atthedetectionwavelengthof200nmagoodbaselineseparationofthreeanalyteswasobtainedwithin14minbyusing50mmolLbax25mmolLNaOH(pH1213)withadditiveof30%(byvolume)DMFasrunningbuffer20kVasanappliedv

8、oltage.Thecalibra2tioncurveswerelinearintherangeof210120mgLfHXS110100mgLfDESDIESwithcrelationcoefficientsof019998019992019994respectively.Thelimitsofdetection(SN=3)ofHXSDESDIESwere019014013mgLrespectively.Theav2eragereco

9、veriesfromsamplesatspikedconcentrationlevelof50mgLwererangedfrom92%to98%withRSDsof213%319%.Themethodshowedagoodrepeatabilityhighsensitivitywasappliedinthedeterminationofthreeanalytesinrealsamplewithsatisfactyresult.Keywo

10、rds:capillaryelectrophesisaquaticproducthexestroldiethylstibestroldienestrol激素是一類具有調(diào)節(jié)生物機體代謝、生長、發(fā)育、生殖等作用的化學(xué)物質(zhì)。己烷雌酚(HXS)、己烯雌酚(DES)、雙烯雌酚(DIES)是常見的人工合成雌激素(分子結(jié)構(gòu)式見圖1)由于其結(jié)構(gòu)簡單、易于合成、成本低等特點近年來逐漸在飼料工業(yè)得到廣泛應(yīng)用。雌酚類激素對水生動物的正常合成代謝有刺激作用可促

11、使動物體內(nèi)氮停留增加導(dǎo)致氨基酸合成蛋白質(zhì)的速度加快而增重[1]。水產(chǎn)品中殘留的激素進入人體后蓄積到一定程度會破壞機體的正常生理平衡[2]。對于這類激素歐盟現(xiàn)已禁止使用美國和加拿大則限量使用。我國規(guī)定動物組織中不得檢出DES但對HXS和DIES殘留的測定標準尚待制定[3]。第1期林子俺等:水產(chǎn)品中己烷雌酚、己烯雌酚與雙烯雌酚殘留的毛細管電泳測定50mmolLpH1210硼砂氫氧化鈉體系為運行緩沖液考察了不同的緩沖體系對電滲流和分離效果的影

12、響。結(jié)果表明只有在堿性緩沖體系下(如硼酸鹽體系和硼砂氫氧化鈉體系)才能觀察到3種雌酚的電泳峰且在硼砂氫氧化鈉體系下3種雌酚的電泳峰尖銳、峰形對稱。所以選擇硼砂氫氧化鈉為運行緩沖液。21113緩沖液酸度的影響雌酚類物質(zhì)由于2個苯環(huán)上各有1個羥基在堿性條件下極易電離形成帶負電荷的離子有利于減緩遷移速率以達到分離。根據(jù)此原理配制pH913～1315的硼砂氫氧化鈉緩沖液進行實驗。結(jié)果表明隨著pH的升高毛細管內(nèi)層表面的負電荷增加電滲流加大遷移時間

13、相應(yīng)縮短但分離效果不顯著當(dāng)pH大于1010時被測組分的遷移時間逐漸增長(可能是由于此時因被電離而帶負電荷的組分對遷移速率的影響大于電滲流對遷移速率的影響)分離趨勢明顯。綜合考慮毛細管對酸堿的適用范圍選擇pH值為1213。21114緩沖液濃度的影響以pH1213的硼砂氫氧化鈉(濃度比2∶1)為緩沖液考察硼砂濃度分別為5、10、20、25、50、75mmolL時對遷移時間的影響。結(jié)果表明硼砂濃度為5～50mmolL時HXS能與另2種組分達到

14、基線分離但DES和DIES無法實現(xiàn)基線分離。隨著濃度增大3組分分離效果沒有明顯改善且遷移時間延長焦耳熱現(xiàn)象明顯。所以選擇50mmolL硼砂25mmolL氫氧化鈉為最佳濃度。21115DMF體積分數(shù)的影響實驗發(fā)現(xiàn)采用區(qū)帶毛細管電泳很難將DES和DIES同時分離主要是由于二者荷質(zhì)比極為相似因此其表觀遷移速率相近。適當(dāng)引入一些添加劑有利于改善分離效果。實驗對比了十二烷基硫酸鈉(SDS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、環(huán)糊精、吐溫280、曲

15、拉通X2100、二甲亞砜、DMF等添加劑的效果結(jié)果表明吐溫280和DMF對DES和DIES具有分離能力。但對于吐溫280隨著其濃度的增大3組分的色譜峰高降低對方法的檢出限和穩(wěn)定性不利而DMF體積分數(shù)的變化則對3組分的峰高沒有影響。實驗表明當(dāng)DMF的體積分數(shù)大于30%時3組分能夠完全基線分離。隨著體積分數(shù)不斷增大遷移時間相應(yīng)增長為縮短分析時間選定DMF體積分數(shù)為30%。21116分離電壓、進樣時間與溫度的選擇考察了分離電壓對被測物遷移時間

16、的影響提高分離電壓可以縮短組分的遷移時間但由于受到儀器限制以及考慮焦耳熱的影響選擇分離電壓為20kV。選擇進樣時間為3、5、8、10、12、15s考察進樣時間和組分峰高間的關(guān)系。結(jié)果表明進樣5s后組分峰高增加不明顯且進樣時間過長會對組分的分離產(chǎn)生負面影響所以實驗選擇進樣5s?？疾炝?5、20、25、30℃時的遷移時間和組分峰高的變化。溫度過低或過高均會發(fā)生基線漂移所以選擇實驗溫度為25℃。圖2標準品的毛細管電泳圖Fig12Electro

17、pherogramofstardmixtureEOF:electroosmoticflow1.HXS2.DES3.DIES在上述優(yōu)化條件下HXS、DES、DIES(質(zhì)量濃度均為5010mgL)在14min內(nèi)得到基線分離(見圖2)。212方法的重復(fù)性、線性范圍及檢出限在優(yōu)化條件下將50mgL的HXS、DES、DIES標準溶液連續(xù)進樣5次遷移時間和峰面積的相對標準偏差(RSD)分別為015%～017%、016%～018%重復(fù)性良好。配制不同

18、質(zhì)量濃度的HXS、DES、DIES的混合標準溶液在優(yōu)化條件下考察其線性范圍和檢出限結(jié)果見表1。HXS、DES和DIES的電泳峰面積與質(zhì)量濃度約在2個數(shù)量級范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系檢出限(SN=3)為013～019mgL相關(guān)系數(shù)r2為019992～019998。表1方法的標準曲線、線性范圍、檢出限及加標回收率Table1Calibrationcurvelinearrangedetectionlimitspikedrecoveryofthem

19、ethod(n=5)CompoundRegressionequation3r2Linearrangeρ(mgL1)Detectionlimitρ(mgL1)AddedρA(mgL1)FoundρF(mgL1)RecoveryR%RSDsr%HXSY=011663X014593019998210～1200195010451892319DESY=015683X113945019992110～1000145010481898213DIESY=